ELISA是什么檢測方法？一文讀懂酶聯(lián)免疫吸附測定的原理、步驟與應用

ELISA，即酶聯(lián)免疫吸附測定，是現(xiàn)代生命科學領域一項不可或缺的基石技術。無論是在疾病診斷、藥物研發(fā)還是基礎科研中，它都為研究人員提供了高靈敏度、高特異性的檢測手段，能夠?qū)ξ⒘可锓肿舆M行精確定量。那么，ELISA是什么檢測方法？本文將為您詳細解讀。

什么是ELISA

酶聯(lián)免疫吸附測定法ELISA（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay），是一種將抗原抗體的特異性免疫反應與酶的高效催化作用相結(jié)合的檢測技術。其核心原理（以最常見的雙抗體夾心法為例）可分為以下幾個步驟：

1.包被：將特異性的捕獲抗體固定（包被）在固相載體（如96孔酶標板）的表面，然后洗滌去除未結(jié)合的抗體。

2.加樣：加入待測樣本，如果樣本中含有目標抗原，它就會與固相載體上的捕獲抗體特異性結(jié)合。之后洗滌，去除樣本中其他未結(jié)合的雜質(zhì)。

3.加酶標抗體：加入酶標記的檢測抗體。該抗體能與已經(jīng)被捕獲的抗原上的另一個位點結(jié)合，形成“捕獲抗體-抗原-酶標檢測抗體”的“三明治”復合物。然后再次洗滌，去除多余的、未結(jié)合的酶標抗體。

4.顯色：加入酶的底物溶液。復合物上的酶會催化底物發(fā)生反應，產(chǎn)生顏色變化。

5.分析：顏色的深淺與樣本中抗原的濃度成正比。通過酶標儀測定吸光度值（OD值），即可對目標抗原進行定性或定量分析。

ELISA類型

根據(jù)實驗設計不同，ELISA可分為4種主要類型，以適應不同的檢測需求。

1.直接ELISA(DirectELISA)：這是ELISA類型中比較簡單的方法。將抗原固定后，直接加入被沒標記的特異性抗體進行檢測。優(yōu)點是步驟少，速度快；缺點是每個抗體都要單獨標記，成本高且靈活性差。

2.間接ELISA(IndirectELISA):相比直接ELISA，間接ELISA會多出一個步驟，先加入不帶標記的一抗，再加入能識別一抗的酶標二抗。優(yōu)點是靈敏度高，且一種標記二抗可用于多種不同一抗，通用性強，成本效益高。

3. 夾心ELISA(SandwichELISA)：這是一種將待檢測抗原夾在兩種抗體之間，像三明治一樣。先將“捕獲抗體”固定，加入樣本后捕獲抗原，再加入“檢測抗體”進行識別。這種雙抗體識別模式使其特異性和靈敏度都非常高，是定量檢測抗原“金”標準。

4.競爭ELISA(CompetitiveELISA)：當待檢測分子量很小或抗體配對很困難時使用。樣本中的抗原會與我們加入的已知濃度抗原去“競爭”結(jié)合固定抗體。樣本中的抗原越多，結(jié)合標記抗原就越少，顏色反應就越弱。因此，信號強度與濃度成反比例。因此，信號強度與樣本濃度成反比。

ELISA步驟

雖然不同ELISA類型細節(jié)有所不同，但核心步驟萬變不離其宗，通常在一個被稱為“ELISA板”的96孔板中進行：

1.包被：將抗原或捕獲抗體固定在ELISA微孔板的表面。

2.封閉：用牛血清白蛋白（BSA）等無關蛋白，封閉板上未結(jié)合的位點，防止后續(xù)抗體非特異性吸附。

3.加樣與孵育：加入待測樣本或抗體，在特定溫度下孵育，讓抗原抗體充分反應。

4.洗滌：吸取未結(jié)合的物質(zhì)，減少背景干擾。

5.加入酶標抗體和底物：加入酶標抗體，孵育并洗滌，再加入酶底物顯色。

6、終止反應與讀板：加入終止液停止顏色反應，并使用酶標儀在特定波長下讀取各孔的吸光度（OD）值，最終計算出結(jié)果。

Elisa應用

Elisa憑借其強大的檢測能力，滲透在各個領域：

醫(yī)學診斷：檢測病毒抗體（如HIV、肝炎病毒）、激素水平（如HCG驗孕）、腫瘤標志物等。

食品安全：檢測食物中的過敏原、獸藥殘留、非法添加劑、致病菌毒素等。

生命科學研究：定量檢測細胞因子、生長因子等各種蛋白質(zhì)的表達水平。

環(huán)境監(jiān)測：檢測水體和土壤中的農(nóng)藥殘留及工業(yè)污染物。

藥物研發(fā)：用于篩選藥物和評估藥代動力學。

綜合上述，ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測定）是一種基于抗原抗體特異性結(jié)合，并通過酶催化顯色反應進行定量或定性分析的強大免疫檢測方法。它以其多樣化的類型和標準化的操作流程，成為了現(xiàn)代科學研究和工業(yè)檢測中不可或缺的工具。

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