【通蔚生物】: ELISA幫你介紹生物素親和素系統(tǒng)操作

ELISA幫你介紹生物素親和素系統(tǒng)操作

生物素親和素(又稱抗生物素)系統(tǒng)(biotin avidin system,BAS)標記抗體的技術是20世紀70年代后期發(fā)展起來的一種新的免疫檢測方法。由于親和素與生物素間的親和力極強，結合迅速，且極其穩(wěn)定，生物素系統(tǒng)標記抗體和酶化的標記率高，又不能影響蛋白的活性，使BAS標記技術比常規(guī)酶聯免疫、放射免疫及熒光免疫技術有著更高的靈敏度，為微量抗原、抗體的檢測開辟了新的途徑。近年來，在BAS檢測中多用鏈霉親和素“streptavidin,SA”，它是鏈霉菌系統(tǒng)培養(yǎng)過程中的引起分泌物，完整的鏈霉親和素和從卵白中提取的親和素一樣，也由4條相同的肽鏈組成。因鏈霉親和素在檢測應用中發(fā)生的特異性和非特異性結合的親和素低，所以日漸受重視，已經有取代親和素之勢。

BAS ELISA檢測的方法可分為以下具本內容：
①對于抗原抗體系統(tǒng)，包括免疫細胞化學、ELISA、免疫印跡法等都適用，應用程度范圍廣；
②BAS在溫和條件下可與各類生物大分子如蛋白質、脂多糖等結合，并且這種結合對原生物大分子的生物活性無影響；
③每個親和素分子可與4個生物素分子結合，所以可以偶合更多連接生物素的酶分子，從而大大提高了靈敏度；
④生物素和親和素間親和力強，故二者一旦結合，就極為穩(wěn)定，不受在ELISA方法中的保溫及多次洗滌影響，而且這種結合反應時間比抗原抗體反應所需時間短；
⑤結果專一性強，非特異性顯色或染色背景極低；
⑥第一抗體稀釋度高，可節(jié)約抗體。

生物系親和素系統(tǒng)有以下原理：
1.BA法亦稱LBA法。系將特異性抗體生物素化，將酶分子標記在親和素分子上，生物素的抗體與抗原結合后，再借BAS ELISA的親和力將酶分子聯結到抗原分子上，經酶促反應即可檢出抗原。
2.BAB法亦稱BRAB法。將特異性抗體系統(tǒng)的生物素化和酶標生物素聯成一體。
3.ABC法原理與BAB法基本相同，只是親和素和酶標記生物素需要先按一定比例形成復合物，這種框架結構結合了形成大量的酶分子，當親和素尚未被酶標生物素飽和時，生物素化抗體即可與之結合。

以上便是BAS ELISA的三種基本檢測法。上述方法中，如將第二抗體生物素化，即為間接法。由于間接法增加了一級抗原抗體反應，因而比直接法更敏感，應用范圍更廣。近年來許多學者對上述基本方法進行了改良，有人用親和素抗體或A蛋白作橋聯物。另外還發(fā)展了BA ELISA競爭法和抑制法等。

生物素或親和素與抗體分子或標記物結合后，既不影響前者的親和力，也不改變后者的特性。親和素分子的4個活性部位并非都和連接在抗體分子上的生物素殘基結合，剩下的游離部位尚可作為另一種生物素標記蛋白質的受體。這些特點就是BAS免疫標記技術的基礎和原理。