酶聯(lián)免疫技術(shù) | 一文讀懂酶聯(lián)免疫試劑盒（ELISA)

ELISA試劑盒在國(guó)內(nèi)有很多叫法，例如ELISA檢測(cè)試劑盒、酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒等...那么，elisa試劑盒是用來(lái)干什么的呢？ELISA試劑盒是一種常用的實(shí)驗(yàn)室免疫分析技術(shù)，用于檢測(cè)各種生物分子，如抗體、抗原、蛋白質(zhì)和細(xì)胞因子。ELISA試劑盒其高靈敏、可操作性高等優(yōu)勢(shì)廣泛應(yīng)用于科研、醫(yī)療、食品及環(huán)境檢測(cè)等領(lǐng)域。下面上海通蔚生物詳細(xì)為大家介紹下酶聯(lián)免疫試劑盒原理、用途、種類(lèi)、使用方法及購(gòu)買(mǎi)指南。帶您全面了解ELISA試劑盒。

圖1 通蔚生物elisa試劑

  目錄：

  1.酶聯(lián)免疫試劑盒原理

  2.酶聯(lián)免疫試劑盒用途

  3.酶聯(lián)免疫試劑盒種類(lèi)

  4.酶聯(lián)免疫試劑盒的使用方法

  5.酶聯(lián)免疫試劑盒選擇

  一、酶聯(lián)免疫試劑盒原理

ELISA是一種利用特異性抗體（或抗原）捕獲樣品中的目標(biāo)抗原（或抗體），并利用酶與其底物的反應(yīng)檢測(cè)/定量目標(biāo)分子的方法。該方法原理是將抗原或抗體吸附到固相載體表面，然后加入酶標(biāo)記的二抗，形成酶標(biāo)抗原-抗體復(fù)合物。當(dāng)?shù)孜锶芤杭尤氲椒磻?yīng)體系中時(shí)，底物在酶的催化下發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生顏色變化。通過(guò)檢測(cè)顏色變化，可以確定是否存在待檢測(cè)的抗原或抗體。根據(jù)其原理，該檢測(cè)又分為直接ELISA、間接ELISA、夾心ELISA、競(jìng)爭(zhēng)性ELISA等。

圖2 為底物在酶的催化下發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生顏色變化

  二、酶聯(lián)免疫試劑盒用途

  Elisa試劑盒用于檢測(cè)各種生物分子，如抗體、抗原、蛋白質(zhì)和細(xì)胞因子。其主要應(yīng)用如下：

  1.抗體檢測(cè)：ELISA試劑盒可用于檢測(cè)體液中的特定抗體，如病毒抗體、抗細(xì)胞自身抗體等，對(duì)于疾病的診斷、感染的篩查以及免疫學(xué)研究非常重要。

  2.抗原檢測(cè)：試劑盒也可用于檢測(cè)樣品中的特定抗原，如病原體抗原、腫瘤標(biāo)志物等，這在疾病的早期診斷、藥物治療監(jiān)測(cè)以及流行病學(xué)調(diào)查中具有重要意義。

  3.蛋白質(zhì)檢測(cè)：試劑盒可用于定量檢測(cè)樣品中特定蛋白質(zhì)的濃度，如細(xì)胞因子、酶類(lèi)、激素等，對(duì)于生物學(xué)研究、臨床診斷和藥物研發(fā)等都具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

  4. 細(xì)胞因子檢測(cè)：試劑盒還可用于檢測(cè)樣品中的細(xì)胞因子，如白細(xì)胞介素、干擾素等，這對(duì)于炎癥反應(yīng)的評(píng)估、免疫調(diào)節(jié)研究以及免疫治療監(jiān)測(cè)具有重要意義。

  除此之外，ELISA試劑盒還可以提供定量測(cè)定目標(biāo)物質(zhì)的濃度，通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)曲線的比較，可以獲得準(zhǔn)確的目標(biāo)物質(zhì)濃度數(shù)據(jù)。這一特性使得其在藥物開(kāi)發(fā)和藥物篩選、環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品安全檢測(cè)、病毒學(xué)研究和植物學(xué)研究等領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用。

  三、酶聯(lián)免疫試劑盒種類(lèi)

  ELISA試劑盒種類(lèi)繁多，根據(jù)檢測(cè)目標(biāo)分為，ELISA試劑盒的常見(jiàn)的種類(lèi)：

  1、細(xì)胞因子檢測(cè)試劑盒：

  如白介素、選擇素、集落刺激因子，腫瘤壞死因子，干擾素，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子，趨化因子，細(xì)胞因子受體，粘附分子，生長(zhǎng)因子，凋亡因子等等。

  2、肝纖維化檢測(cè)elisa試劑盒：

  如纖維連接蛋白，透明質(zhì)酸，膠原，基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子，基質(zhì)金屬蛋白酶，層粘蛋白等。

  3、心肌檢測(cè)elisa試劑盒：

  如肌鈣蛋白，肌紅蛋白，C-反應(yīng)蛋白等等。

  4、內(nèi)分泌檢測(cè)elisa試劑盒

  如甲狀腺,胰腺,性激素,孕酮,睪酮,生長(zhǎng)激素,生長(zhǎng)抑素,內(nèi)皮素,皮質(zhì)醇,骨鈣素,催乳素,促腎上腺皮質(zhì)激素,促卵泡素,雌二醇，雌三醇，5-羥色胺，17-羥孕酮等。

  5、自身免疫檢測(cè)elisa試劑盒：

  如甲狀腺,鹽水可提取核抗原抗體(ENA),抗核抗體,DNA,抗心磷脂抗體,類(lèi)風(fēng)濕因子,循環(huán)免疫復(fù)合物,抗胰島細(xì)胞抗體,胰蛋白酶原,Sm,大皰性類(lèi)皰瘡,蛋白酶,抗組蛋白抗體,粒細(xì)胞彈性蛋白酶,皮膚抗體,腎上腺抗體,腎小球基底膜,腎小球基底膜抗體,髓過(guò)氧化物酶,條紋肌抗體,網(wǎng)硬蛋白抗體,胃壁細(xì)胞抗體,胃蛋白酶,系統(tǒng)性紅斑狼瘡,細(xì)菌性滲透性增強(qiáng)因子等。

  6、標(biāo)志物檢測(cè)elisa試劑盒：

  如腫瘤標(biāo)志物，組織多肽抗原，腫瘤相關(guān)因子，胰腺癌，直腸癌，細(xì)胞角蛋白片段，胃腸癌，鐵蛋白，糖鏈抗原，神經(jīng)異性稀醇化酶，上皮膜抗原，人抗小鼠抗體，前列腺，甲胎蛋白，肝癌，大腸癌，肺癌，大小便隱血檢測(cè)，癌胚抗原，β-2。

圖3 通蔚白介素試劑盒

  四、酶聯(lián)免疫試劑盒的使用方法

  elisa試劑盒操作步驟：

   試劑準(zhǔn)備

  1.使用前將所有試劑平衡至室溫。

  2.洗液：如果濃縮液中已經(jīng)形成結(jié)晶，平衡至室溫，并輕輕地?fù)u晃直到結(jié)晶*溶解。加入去離子水或蒸餾水稀釋20ml濃縮洗滌液至500ml。

  3.底物溶液：顯色試劑A和B應(yīng)該在使用前15min以等體積混合。避光保存。每孔需要200ul生成的混合物。

  4.IL-6標(biāo)準(zhǔn)品：使用5ml標(biāo)準(zhǔn)稀釋液RD5T(適用于細(xì)胞培養(yǎng)上清液樣本)或標(biāo)準(zhǔn)稀釋液RD6F(適用于血清/血漿樣本)重新配制IL-6標(biāo)準(zhǔn)品。重新配制的產(chǎn)品為300pg/ml貯存液。稀釋前允許將標(biāo)準(zhǔn)品至少輕輕攪拌15min。

  5.吸取適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)稀釋液667ul到pg/mlEP管，500ul稀釋液到其它EP管中。適用貯存液配制一系列的稀釋液(如下)。進(jìn)行下一次轉(zhuǎn)移前充分地混勻各個(gè)EP管。沒(méi)有稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品作為高標(biāo)準(zhǔn)。適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)稀釋液作為0標(biāo)準(zhǔn)(0pg/ml)。

  注意：使用時(shí)戴眼睛、手、臉和衣服的防護(hù)。

  elisa試劑盒的注意事項(xiàng)：

  1.elisa試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

  2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

  3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

  4.elisa試劑盒請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值)，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

  5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

  6.底物請(qǐng)避光保存。

  7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

  8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

  9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

  10.如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。

  五、酶聯(lián)免疫試劑盒選擇

  elisa試劑盒選擇對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性是至關(guān)重要的，在選購(gòu)elisa試劑盒選擇可以從以下幾個(gè)方面來(lái)選擇：

  1.選擇靈敏度合適的試劑盒：靈敏度是檢測(cè)目標(biāo)分子的最低濃度的能力。如果您需要檢測(cè)低濃度的目標(biāo)分子，那么選擇高靈敏度的試劑盒是必要的。

  2.選擇特異性好的試劑盒：特異性是指試劑盒只對(duì)特定目標(biāo)分子產(chǎn)生反應(yīng)的能力。選擇特異性好的試劑盒可以避免假陽(yáng)性結(jié)果。

  3.選擇有良好重復(fù)性的試劑盒：重復(fù)性是指相同樣本在不同時(shí)間或不同實(shí)驗(yàn)室條件下得到相同結(jié)果的能力。選擇有良好重復(fù)性的試劑盒可以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。

  4、選擇技術(shù)支持和服務(wù)商家：優(yōu)質(zhì)品牌的試劑盒制造商通常提供全面的技術(shù)支持和服務(wù)，包括使用指導(dǎo)、售后服務(wù)等。這些支持可以幫助您更好地進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，提高實(shí)驗(yàn)效率。

  上海通蔚生物一直致力于研發(fā)生產(chǎn)高質(zhì)量的科研試劑，對(duì)每一批產(chǎn)品實(shí)行嚴(yán)格的質(zhì)控，嚴(yán)格控制批間差和批內(nèi)差，為生命科學(xué)提供全面的免疫檢測(cè)相關(guān)產(chǎn)品！