從零到一：ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟完全指南

  ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟。大家在操作實(shí)驗(yàn)過程中，通常包括包被、封閉、洗滌、加入酶標(biāo)抗體和顯色液等。針對上述步驟，小蔚為大家一一詳細(xì)介紹。

  第一步包被。把抗原和共享載體結(jié)合起來，之后就是比較重要一步就是洗滌，在整個ELISA實(shí)驗(yàn)過程相對來說比較重要的一步，每一次操作中間都要洗滌。洗滌液一般是緩沖液，里面加上吐溫，土溫是去污劑，可以有效把沒有結(jié)合的物質(zhì)洗掉。

  第二部是封閉。就是固相材體就相當(dāng)于一個非常大的空間，抗原只是結(jié)合了其中非常少的一部分，其他地方還有很多待結(jié)合的位點(diǎn)，需要用到雜蛋白去把這些位點(diǎn)全部都覆蓋起來，才能不讓一抗和二抗與空白的位點(diǎn)結(jié)合。

  第三步是洗滌。封閉之后，還要把多余的蛋白洗滌之后，就可以進(jìn)行加樣，把待檢抗體加進(jìn)體系中，讓待檢抗體和包在固項(xiàng)載體上的抗原進(jìn)行待異性的結(jié)合。把多余的待檢測抗體洗滌之后，就會得到這樣的抗原和抗體結(jié)合的復(fù)合物。

  第四步是加入酶標(biāo)二抗。這部分抗體屬于一抗的FC端結(jié)合的抗體，同時還帶著酶標(biāo)記，所以它是起到兩種作用。把多余的二抗洗滌之后，就會形成一種二抗、一抗和待檢測抗原的還有酶的復(fù)合物。

  最后就是加入顯色液。可以讓它產(chǎn)生顏色的反應(yīng)。終止之后一般是加入氫氧根或者酸根離子，就是鹽酸或者氫氧化鈉去終止整個反應(yīng)，這就是ELISA實(shí)驗(yàn)過程。

  接下來就是拿酶標(biāo)語上去讀數(shù)，得到最終把它量化的儀器叫做酶標(biāo)語，就是專門去作為讀數(shù)用的。一般來說現(xiàn)在用鹽酸中指的波長反應(yīng)是450納米，去對它進(jìn)行讀數(shù)，最后對結(jié)果進(jìn)行量化的體現(xiàn)。

  在ELISA過程中，要注意以下幾點(diǎn)：

  第一點(diǎn)是包被液的選擇。包被液就是把抗原包被在固相載體上的稀釋液S包，一般是兩種，一種是PBS，最常用的兩種是PBS和CPS，其中這兩個里面就更常用則是PBS。

  第二點(diǎn)是包被溫度的選擇。一般來說這邊都是4度條件下，4度調(diào)一下包被過夜或者37度保溫2小時，37度反應(yīng)會更快一點(diǎn)，但是反應(yīng)效果一般是沒有4度是好的，所以剪映是4度條件下包被。

  第三點(diǎn)是包被濃度的選擇。包被濃度是根據(jù)實(shí)驗(yàn)效果、實(shí)驗(yàn)條件還有包被物質(zhì)的性質(zhì)去改變的。一般來說包被濃度推薦是1-5微克每毫升。

  上述是elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)，在elisa實(shí)驗(yàn)過程嚴(yán)格遵循說明書和注意事項(xiàng)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果也會更加精確。