【通蔚生物】: 如何選擇流式抗體的幾大要素

如何選擇流式抗體的幾大要素

流式抗體熒光搭配主要由幾個(gè)因累決定的：流式細(xì)胞儀能檢測(cè)多少個(gè)通道，需要同時(shí)檢測(cè)多個(gè)指標(biāo)，廠家的抗體有多少種熒光標(biāo)記，如果流式細(xì)胞儀的通道越多。

流式抗體的幾大要素如下：

1. 常用克隆
對(duì)于特定的細(xì)胞表面抗原CD家族蛋白，通常會(huì)有多種不同克隆號(hào)的單抗。流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中使用的克隆號(hào)越常見，實(shí)驗(yàn)獲得成功的幾率也越大。
2. 高染色指數(shù)
高染色指數(shù)有利于陽性和陰性細(xì)胞群的分離，特別是檢測(cè)的目的蛋白表達(dá)量低的情況下。
3. 低背景結(jié)合
雖然通常使用同型對(duì)照或者抗原保守區(qū)阻斷劑（Fc Blocking Reagent）可以降低背景，但熒光染料與抗體的偶聯(lián)效果不佳會(huì)明顯加重背景結(jié)合。降低背景使得界定陽性和陰性細(xì)胞更加容易。

流式抗體使用注意事項(xiàng)：
1、建議實(shí)驗(yàn)的流式細(xì)胞的數(shù)量和抗體的比例要選擇適當(dāng)。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)過量或抗體過量都有可能使實(shí)驗(yàn)結(jié)果受影響，因此需要優(yōu)化試驗(yàn)條件。注：不同的流式技術(shù)對(duì)抗體的需求量有較大差異，例如傳統(tǒng)一般的流式細(xì)胞術(shù)需要1×106個(gè)細(xì)胞為開始起始上樣量，抗體用量為多少，而微流式細(xì)胞術(shù)一般則只需5×105個(gè)細(xì)胞，抗體用量減少到5μl。
2、直標(biāo)記的流式的抗體應(yīng)該4℃避光保存，不需要冷凍。
3、盡量選擇經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證過的流式抗體，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

隨著流式細(xì)胞術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域的日益廣泛，流式抗體及熒光標(biāo)記產(chǎn)品的種類繁多、數(shù)量也在不間斷增多，加上多色分析實(shí)驗(yàn)的方案需求的增長，逐漸產(chǎn)生了抗體難選擇、熒光難搭配等問題，給實(shí)驗(yàn)順利開展帶來了諸多困擾