在生物實(shí)驗(yàn)中,試劑盒的使用扮演著舉足輕重的角色。其中,Elise試劑盒以其卓越的性能和廣泛的應(yīng)用范圍,受到了廣大科研工作者的歡迎。要充分發(fā)揮Elise試劑盒的優(yōu)勢(shì),需要掌握正確的使用方法。本文上海通蔚生物將為你揭示如何使用Elise試劑盒,幫助你成為實(shí)驗(yàn)達(dá)人。
了解試劑盒的組成和原理
在使用Elise試劑盒之前,首先需要了解試劑盒的組成和原理。Elise試劑盒主要包括反應(yīng)液、終止液和洗滌液。反應(yīng)液中含有特異性識(shí)別目標(biāo)分子的抗體,終止液用于終止反應(yīng),洗滌液則用于去除未結(jié)合的物質(zhì)。了解這些組成部分及其作用原理,有助于正確使用試劑盒。
Elise試劑盒使用方法詳解
在實(shí)驗(yàn)前,請(qǐng)將試劑盒、樣本取出;室溫放置半小時(shí),恢復(fù)至室溫。
第一步:ELISA緩沖液配制
吸取5毫升10x Assay Buffer緩沖液,至50ml離心管,吸取50ml20x洗液至1升量筒,加蒸餾水至1000毫升。
第二步:標(biāo)準(zhǔn)品溶解和稀釋
取出標(biāo)準(zhǔn)品,2000rpm離心2分鐘,以便管壁上的粉末集中到管底,根據(jù)標(biāo)簽,加入一定的蒸餾水,蓋上蓋子,渦旋震蕩5秒,靜置10-30分鐘至粉末完全溶解,準(zhǔn)備8個(gè)1.5毫升的EP管,標(biāo)注S1至S7和空白,用于標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)策梯度稀釋?zhuān)?br />
加入150微升標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液,吸取150微升重溶的標(biāo)準(zhǔn)品,至S1中進(jìn)行2倍稀釋?zhuān)荡?0次混勻,渦旋震蕩5秒,從S1管中吸取150微升液體,至S2管中,吹打混勻,繼續(xù)以上步驟梯度稀釋至S2至S7;
第三步:稀釋檢測(cè)抗體
檢測(cè)抗體為100x濃縮液,所以吸取50微升檢測(cè)抗體,至5毫升1x Assay Buffer震蕩混勻備用;
第四步:加樣
取出已恢復(fù)至室溫的酶標(biāo)板,加入300微升洗液,以洗去包被抗體保護(hù)劑,使包被抗體處于較好的活性狀態(tài),靜置浸泡30秒。洗板結(jié)束后,立即使用酶標(biāo)板,不要讓酶標(biāo)板干燥。
elise試劑盒使用注意事項(xiàng)包括:
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嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范進(jìn)行人員防護(hù)和消毒。
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試劑儲(chǔ)存要按照規(guī)定的溫度和條件進(jìn)行。
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樣本處理時(shí)要保持穩(wěn)定,任何樣本在操作之前都應(yīng)該穩(wěn)定,這樣才能得到更可靠的結(jié)果。
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加樣時(shí)要將所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出。
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保溫時(shí)要注意溫育的溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確,保證各板的溫度都能迅速平衡。
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任何可能引起污染的因素都需要避免,包括交叉污染,潔凈實(shí)驗(yàn)環(huán)境。
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在完成Elise試劑盒操作后,需要對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析和解釋。如果發(fā)現(xiàn)異常結(jié)果,應(yīng)仔細(xì)檢查操作步驟是否正確或者重新做實(shí)驗(yàn)。
上述為大家介紹Elise試劑盒使用方法及步驟,在Elise試劑盒使用過(guò)程除了上述方法之外,要遵守使用事項(xiàng),避免操作過(guò)程出現(xiàn)問(wèn)題。