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牛血清知多少?一篇文章帶你全面了解

發(fā)布時(shí)間:2024-08-20     發(fā)布作者:上海通蔚生物

  牛血清是動(dòng)物血清一種,是細(xì)胞培養(yǎng)不可或缺的天然培養(yǎng)基。牛血清富含細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份,通常含有一定比例的蛋白質(zhì)、糖類、礦物質(zhì)和維生素。牛血清按種類分為胎牛血清、新生牛血清、小牛血清。

牛血清

  【胎牛血清】(FoetalBovineSerum,簡(jiǎn)稱FBS):是采自5-8個(gè)月胎齡牛胚胎中的胎血。胎牛血清中含有豐富的生長(zhǎng)因子、細(xì)胞黏附分子和其他細(xì)胞培養(yǎng)所需的成分,非常適合各種細(xì)胞的培養(yǎng)。


  這里值得注意的是由于其來源于胎兒,胎牛血清具有較高的胚胎抗原含量,因此在一些特定的細(xì)胞培養(yǎng)條件下需要小心使用。


  【新生牛血清】(NewbornCalfSerum,簡(jiǎn)稱NBCS):07天內(nèi)(也有說法是030天內(nèi));


  相比于小牛血清,新生牛血清中的生長(zhǎng)因子和抗體水平較低。它的優(yōu)勢(shì)在于它的穩(wěn)定性和較低的胚胎抗原含量,這使得它在一些特殊細(xì)胞類型的培養(yǎng)中更適用。


  【小牛血清】(CalfSerum):采自出生30天至1年的小牛。它通常含有較高的成長(zhǎng)因子和抗體水平,可以促進(jìn)細(xì)胞的增殖和生長(zhǎng)。小牛血清中的激素和免疫因子水平相對(duì)較低,這使得它在一些特定的細(xì)胞培養(yǎng)條件下更具優(yōu)勢(shì)。


  牛血清對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)用途


  胎牛血清用途:胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)常用的血清。適合多種細(xì)胞類型的培養(yǎng),廣泛應(yīng)用常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞傳代和細(xì)胞研究領(lǐng)域。胎牛血清采自發(fā)育中的牛胚胎,營(yíng)養(yǎng)成分較為豐富,且此時(shí)的牛胚胎沒有完整的補(bǔ)體系統(tǒng),因此胎牛血清無需熱滅活,內(nèi)毒素含量低,保證細(xì)胞健康!


  新生牛血清用途:新生牛血清的營(yíng)養(yǎng)成份略高于小牛血清,胚胎抗體水平較低,可用來培養(yǎng)肝細(xì)胞和骨髓細(xì)胞等細(xì)胞。


  小牛血清用途:小牛血清主要是提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),提供激素和各種生長(zhǎng)因子、結(jié)合蛋白、促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用!適合哪些對(duì)激素、免疫因子要求較低的細(xì)胞。


  如何篩選牛血清?


  因胎牛血清使用較為廣泛,這里我們重點(diǎn)介紹一下對(duì)胎牛血清的篩選。胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中常用的補(bǔ)充劑,其質(zhì)量對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果至關(guān)重要。因此,在選擇胎牛血清時(shí),需要進(jìn)行嚴(yán)格的篩選。


  1.pH值:首先,要確保胎牛血清的pH值在7.47.6的范圍內(nèi),這與細(xì)胞生長(zhǎng)的最佳生理環(huán)境相一致。


  2.有效成分:接下來,需要檢查胎牛血清中細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、激素、粘附因子等有效成分的質(zhì)量水平。這些成分對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和存活起著關(guān)鍵作用。同時(shí),還需要關(guān)注血清中免疫抑制因子的含量,因?yàn)檫^高的免疫抑制因子可能會(huì)抑制細(xì)胞的免疫反應(yīng)。


  3.內(nèi)毒素:內(nèi)毒素是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的一種成分,它可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果造成負(fù)面影響。因此,選擇內(nèi)毒素含量低的胎牛血清至關(guān)重要。


  內(nèi)毒素含量越低,級(jí)別越高,以胎牛血清為例:


  血清中內(nèi)毒素含量10EU/ml時(shí),此血清為特級(jí)胎牛血清;


  血清中內(nèi)毒素含量﹥10EU/ml,≤25EU/ml時(shí),此血清為優(yōu)級(jí)胎牛血清;


  血清中內(nèi)毒素含量25EU/ml時(shí),此血清為標(biāo)準(zhǔn)級(jí)胎牛血清;


  不同廠家,不同批次的血清,內(nèi)毒素?cái)?shù)值也可能有較大差異,因此很多血清廠家在名稱上已不注明級(jí)別。但使用者仍可通過檢測(cè)報(bào)告,自行甄別挑選


  4.細(xì)胞存活率:細(xì)胞存活率是衡量胎牛血清質(zhì)量的重要指標(biāo)之一。高品質(zhì)的胎牛血清可以支持細(xì)胞的存活和增殖,使細(xì)胞在培養(yǎng)皿中生長(zhǎng)良好。


  5.其他指標(biāo):除了上述指標(biāo)外,還需要關(guān)注胎牛血清的血清蛋白含量、補(bǔ)體活性、病毒污染等指標(biāo)。


  6.批次間差異:需要注意的是,即使同一品牌的不同批次胎牛血清之間也可能存在差異。因此,在選擇胎牛血清時(shí),建議根據(jù)具體的細(xì)胞類型和研究目的選擇合適的批次。

牛

  胎牛血清存儲(chǔ)條件


  胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中常用的補(bǔ)充劑,其質(zhì)量對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果至關(guān)重要。為了保持血清的活性,需要進(jìn)行適當(dāng)?shù)拇鎯?chǔ)和使用。


  1.存儲(chǔ):


  長(zhǎng)期儲(chǔ)存:胎牛血清應(yīng)在-20°C或更低溫度下凍存。


  短期儲(chǔ)存:如果需要短期儲(chǔ)存,可以將血清置于4°C冷藏,但應(yīng)在一周內(nèi)用完。如果您的實(shí)驗(yàn)用量較少,建議您選擇分裝的50ml規(guī)格,這可以有效地避免浪費(fèi)和保證血清的質(zhì)量。


  2.使用:


  解凍:解凍血清時(shí),應(yīng)采用緩慢解凍的方式,例如置于4°C冰箱過夜,避免快速解凍導(dǎo)致血清成分發(fā)生變化。


  配制:血清和培養(yǎng)基的配制應(yīng)遵循“現(xiàn)用現(xiàn)配”原則,因?yàn)殚L(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基成分發(fā)生變化,影響細(xì)胞培養(yǎng)效果。建議配好的培養(yǎng)液在3-5天內(nèi)用完。


  避免反復(fù)凍融:反復(fù)凍融會(huì)破壞血清中的活性成分,降低血清質(zhì)量,因此應(yīng)盡量避免。


  避免在4°C或更高溫度儲(chǔ)存過久:長(zhǎng)時(shí)間在4°C或更高溫度下儲(chǔ)存會(huì)加速血清的降解和污染,影響血清品質(zhì)。


  3.其他注意事項(xiàng):


  在進(jìn)行血清操作時(shí),應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作,并定期檢查血清是否有污染跡象。


  胎牛血清融化注意事項(xiàng)及說明


  在水浴過程中,血清瓶的平面要完全浸在水中,并緩慢搖動(dòng)瓶身,使血清均勻解凍,但搖動(dòng)中盡量不要產(chǎn)生泡沫。血清從-20℃取出后,應(yīng)先置于4°C冰箱過夜,第二天再進(jìn)行水浴解凍。


  解凍后的血清,根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)需求,按推薦體積加入到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,充分混勻,制備成新鮮完全培養(yǎng)基(整個(gè)操作需在無菌超凈臺(tái)中進(jìn)行,注意無菌操作)。配制好的完全培養(yǎng)基應(yīng)在4℃冷藏保存,建議在3-5天內(nèi)用完。


  以下是一些補(bǔ)充說明:


  在進(jìn)行血清操作時(shí),應(yīng)佩戴手套,避免污染血清。


  配制培養(yǎng)基時(shí),應(yīng)先將基礎(chǔ)培養(yǎng)基加熱至室溫,再加入血清,并充分混勻。


  胎牛血清需要熱滅火嗎?


  熱滅活是指將血清加熱至56℃,30分鐘,以滅活血清中的補(bǔ)體。補(bǔ)體是一種在免疫反應(yīng)中起重要作用的蛋白質(zhì),它可能對(duì)某些細(xì)胞類型有毒性或抑制其生長(zhǎng)。在胎牛血清中,由于胎齡原因,尚未形成完整的補(bǔ)體系統(tǒng),因此,胎牛血清不會(huì)真正干預(yù)免疫試驗(yàn)。故不需滅活。


  哪些情況對(duì)血清內(nèi)毒素應(yīng)格外留意篩選?


  在以下情況下,對(duì)血清內(nèi)毒素應(yīng)格外留意篩選:


  1.干細(xì)胞:干細(xì)胞對(duì)內(nèi)毒素非常敏感,內(nèi)毒素會(huì)導(dǎo)致干細(xì)胞死亡或功能異常。選擇內(nèi)毒素含量≤1EU/ml的優(yōu)質(zhì)血清對(duì)干細(xì)胞培養(yǎng)至關(guān)重要。


  2.免疫細(xì)胞:過高的內(nèi)毒素會(huì)誘導(dǎo)免疫細(xì)胞釋放炎癥因子,影響免疫反應(yīng),例如抑制小鼠紅細(xì)胞集落的形成。因此,選擇內(nèi)毒素含量低的優(yōu)質(zhì)血清可以減少內(nèi)毒素對(duì)免疫細(xì)胞的影響。


  3.基因敲除相關(guān)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn):由于基因敲除實(shí)驗(yàn)需要保持細(xì)胞的原始狀態(tài),任何引導(dǎo)細(xì)胞衰老或凋亡的試劑都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此,在準(zhǔn)備血清和其他試劑時(shí),盡可能選擇內(nèi)毒素含量≤1EU/ml的血清,對(duì)實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要。


  4.原代培養(yǎng)、雜交瘤融合、細(xì)胞轉(zhuǎn)染:這些實(shí)驗(yàn)對(duì)細(xì)胞的健康和活力要求較高,選擇內(nèi)毒素含量低的優(yōu)質(zhì)血清可以提高實(shí)驗(yàn)成功率。


  5.難養(yǎng)細(xì)胞:難養(yǎng)細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)條件要求較高,選擇內(nèi)毒素含量低的優(yōu)質(zhì)血清可以為細(xì)胞提供更好的生長(zhǎng)環(huán)境,提高細(xì)胞存活率。


  6.長(zhǎng)期培養(yǎng)、長(zhǎng)期凍存、經(jīng)常復(fù)蘇:這些情況下,血清會(huì)經(jīng)?;蜷L(zhǎng)時(shí)間作用于細(xì)胞。為保證細(xì)胞的健康,應(yīng)選擇內(nèi)毒素含量低的優(yōu)質(zhì)血清,以避免內(nèi)毒素長(zhǎng)期累積對(duì)細(xì)胞的毒性影響。


  上述對(duì)牛血清的介紹,牛血清作為細(xì)胞培養(yǎng)的天然培養(yǎng)基,正確的選擇對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)非常關(guān)鍵。希望上述內(nèi)容對(duì)您有所幫助!如果對(duì)牛血清還有疑問,歡迎在線咨詢通蔚顧問。通蔚也為科研提供優(yōu)級(jí)和特級(jí)胎牛血清用于細(xì)胞培養(yǎng),歡迎前來了解!