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酶聯(lián)免疫試劑盒常見5種實(shí)驗(yàn)檢測方法

發(fā)布時(shí)間：2024-07-23     發(fā)布作者：上海通蔚生物

  酶聯(lián)免疫試劑盒也叫“elisa試劑盒”，它是一種檢測生物樣本中抗原存在的技術(shù)。與其他類型的免疫測定一樣，ELISA檢測技術(shù)依靠抗體通過高度特異性的抗體-抗原相互作用來檢測目標(biāo)抗原。ELISA主要有四種類型：直接ELISA、間接ELISA、夾心ELISA和競爭性ELISA。每種方法在酶聯(lián)免疫試劑盒都有其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和適用性。下面為大家詳細(xì)介紹。


  酶聯(lián)免疫試劑盒檢測類型


  直接ELISA法


  1971年，EvaEngvall和PeterPerlmann開發(fā)了一種革命性的免疫檢測方法，稱為酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）。ELISA利用抗體識(shí)別和結(jié)合特定抗原，從而檢測激素、病毒、細(xì)菌和其他生物分子的存在。直接ELISA是一種簡單的ELISA類型，它直接將抗原或抗體固定在固相載體上，并使用標(biāo)記的抗體或抗原進(jìn)行檢測。


  該方法能有效檢測較大的抗原，直接將抗體或抗原包被在酶標(biāo)板上，用酶聯(lián)抗體或抗原進(jìn)行檢測。孵育后，未結(jié)合的抗原或抗體都會(huì)被洗掉。加入底物以產(chǎn)生可見信號(hào)，通常是顏色變化。測量該信號(hào)的強(qiáng)度以確定存在的抗原或抗體的量。


優(yōu)點(diǎn)：
  • 由于僅使用一種抗體，因此過程更快，步驟更少。
  • 與使用二抗的方法相比，減少了交叉反應(yīng)。
缺點(diǎn)：
  • 標(biāo)記每個(gè)一抗既昂貴又費(fèi)時(shí)。
  • 標(biāo)記可能會(huì)影響抗體的有效性。有些抗體無法標(biāo)記。實(shí)驗(yàn)中標(biāo)記一抗的靈活性有限，導(dǎo)致信號(hào)放大最小。


  間接ELISA：


  1978年，Lindstr?m,P等人在直接ELISA的啟發(fā)下，開發(fā)了間接ELISA技術(shù)，用于測量豬IgG。間接ELISA是臨床診斷的關(guān)鍵。它可以檢測血液中的抗體，顯示過去是否接觸過萊姆病、艾滋病毒和禽流感等疾病。


  在間接ELISA中，使用二抗代替一抗來檢測和分離抗原。在孵育過程中，如果血清中存在針對(duì)抗原的抗體，則會(huì)形成抗原抗體復(fù)合物。為了使這些復(fù)合物可視化，需要添加標(biāo)記有與一抗特異性結(jié)合的酶的二抗。間接ELISA廣泛用于內(nèi)分泌學(xué)中以尋找抗原。


優(yōu)點(diǎn)：
  • 允許使用單個(gè)抗物種結(jié)合物測試針對(duì)特定抗原的多種抗血清。
  • 廣泛應(yīng)用于診斷，尤其是篩查大量樣本。
  • 通過二抗增強(qiáng)信號(hào)放大。
缺點(diǎn)：
  • 可能與二抗發(fā)生交叉反應(yīng)，從而產(chǎn)生非特異性信號(hào)。
  • 該過程中需要額外的孵化步驟。



  夾心ELISA：


  1977年，Kato,K等人上發(fā)表了關(guān)于夾心ELISA的研究。夾心ELISA可識(shí)別不同菌株的病原體，在病原體或抗原有限時(shí)很有用。


  微孔板孔被捕獲抗體包被并封閉以防止非特異性結(jié)合。然后加入含有抗原的樣品。將板孵育以使抗原能夠與捕獲抗體結(jié)合。孵育后，清洗可去除未結(jié)合的抗原，僅留下附著的特定抗原。添加并孵育針對(duì)結(jié)合抗原的特異性酶標(biāo)記抗體，與捕獲抗體形成“三明治”。再進(jìn)行一次清洗，去除未結(jié)合的酶標(biāo)記抗體。添加底物，與酶發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生顏色變化。顯色表示陽性結(jié)果，表明酶活性和抗原存在。無色表示陰性結(jié)果，表示沒有抗原。目標(biāo)抗原“夾在”兩種抗體之間，因此該方法得名“夾心ELISA”。這種方法比其他類型的ELISA靈敏度高2-5倍。


優(yōu)點(diǎn)：
  • 該方法可以快速準(zhǔn)確地檢測樣本中的抗原濃度，無需先純化抗原。
  • 它對(duì)于在流行病期間識(shí)別微生物或病原體的菌株很有用，特別是在抗原水平較低或存在許多其他蛋白質(zhì)時(shí)。
缺點(diǎn)：
  • 它要求抗原至少具有兩個(gè)抗體結(jié)合位點(diǎn)，因?yàn)樾枰獌蓚€(gè)抗體來形成夾層。
  • 該技術(shù)只能測量多價(jià)抗原，如蛋白質(zhì)或多糖。



  競爭ELISA


  Yorde,Donald等人1976年開發(fā)了這種方法。當(dāng)測量的抗原很小并且只有一個(gè)抗體結(jié)合位點(diǎn)時(shí)，使用競爭性測定。孔中涂有抗原特異性抗體或抗體特異性抗原。將樣本和酶標(biāo)記的抗原或抗體加在一起。


  標(biāo)記分子和未標(biāo)記分子競爭結(jié)合到孔中。洗去未結(jié)合的分子后，加入酶底物，引起顏色變化。顏色強(qiáng)度與分析物濃度成反比：抗原或抗體濃度低時(shí)吸光度高，而濃度高時(shí)吸光度低。


優(yōu)點(diǎn)：
  • 主要的優(yōu)點(diǎn)是，一抗無需純化即可使用。
缺點(diǎn)：
  • 在競爭性 ELISA 中，隨著原始抗原濃度的增加，信號(hào)會(huì)變?nèi)酢?
  • 發(fā)生這種情況的原因是，樣本中的抗原水平越高，意味著留在孔中的標(biāo)記抗原越少，從而導(dǎo)致信號(hào)越弱。


  多重ELISA


多重免疫測定法對(duì)于研究疾病變化非常有用，有助于監(jiān)測和改善治療。多重ELISA擴(kuò)展了夾心ELISA，可在單個(gè)微量滴定板內(nèi)檢測抗原或樣本上的多個(gè)表位。這一進(jìn)步類似于蛋白質(zhì)陣列格式，可在一個(gè)孔中同時(shí)檢測多種抗原。


優(yōu)點(diǎn)：
  • 它們可實(shí)現(xiàn)高通量分析，每個(gè)孔最多可進(jìn)行 25 次分析。
  • 它們需要的樣本量較少。
  • 在時(shí)間和成本方面都很高效。
  • 它們?cè)试S對(duì)分子水平以及其他多個(gè)水平進(jìn)行評(píng)估。
  • 它們能夠可靠地檢測多種濃度范圍內(nèi)的各種蛋白質(zhì)。
缺點(diǎn)：
  • 需要熟練的專業(yè)知識(shí)才能正確執(zhí)行。
  • 多重檢測可以檢測樣品或檢測溶液中多個(gè)抗體和抗原之間的相互作用。



上述為大家介紹ELISA試劑盒檢測類型，了解這些檢測方法，可以在實(shí)驗(yàn)中結(jié)合優(yōu)缺點(diǎn)選擇適合自己實(shí)驗(yàn)檢測方法提高實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性。