原代細胞培養(yǎng)有哪些步驟？一文盤點原代細胞培養(yǎng)4大步驟

  原代細胞是從組織機體中分離后并且在體外首次培養(yǎng)的細胞，在體外特定的培養(yǎng)條件下進行生長和繁殖，當細胞增值到一定密度（通常在70-90%匯合度）。為了維持細胞生長和狀態(tài)活力，需要將細胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮生長的培養(yǎng)基新容器中進行傳代培養(yǎng)，也稱作繼代培養(yǎng)。相關(guān)閱讀：《什么是原代細胞》

  原代細胞培養(yǎng)步驟

  1、組織收集和處理

  在無菌條件下，從動物或人體組織分離樣本。在收集和處理樣本可以采用消化酶、機械切割或抗體磁珠等方法，將組織分成單個細胞。組織分散成單個細胞后，需要進行洗滌、過濾（例如使用細胞篩）等步驟去除組織碎片和酶。

  2、細胞分離

  根據(jù)目標細胞的特性，選擇合適的細胞分離方法。常用的方法包括密度梯度離心、熒光激活細胞分選(FACS)、磁性激活細胞分選(MACS)等。例如，可以使用密度梯度離心法根據(jù)細胞密度的差異分離不同類型的細胞。篩選、沉淀和離心等步驟通常作為這些方法的輔助步驟，用于去除雜質(zhì)、收集細胞或更換緩沖液等。

  3、培養(yǎng)基的選擇和準備

  根據(jù)分離出的細胞類型和實驗?zāi)康?，選擇合適的培養(yǎng)基。不同的細胞類型對培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分、生長因子和其他添加劑的需求不同。查閱文獻或參考ATCC等細胞庫的建議，選擇適合目標細胞的培養(yǎng)基配方。常用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基包括DMEM、RPMI-1640、Ham'sF-12等，但通常需要根據(jù)具體細胞類型進行調(diào)整。

  4、細胞培養(yǎng)和傳代

  接下來對細胞進行培養(yǎng)和傳代。將分離純化后的細胞重懸于到合適的培養(yǎng)基中，然后接種到預(yù)先用細胞外基質(zhì)（例如膠原蛋白、纖連蛋白、明膠等）包被的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中，提供適當?shù)臏囟取穸群?/span>CO2濃度等條件。原代細胞通常生長較慢且有限，當細胞達到一定匯合度（通常為70-90%）時，需要進行傳代。

  原代細胞培養(yǎng)注意事項

  1、保持無菌條件

  細胞培養(yǎng)需要在無菌環(huán)境下進行，以防止細胞被細菌和真菌污染。在進行原代細胞培養(yǎng)之前，必須確保實驗環(huán)境和所操作工具、培養(yǎng)皿都處于嚴格的無菌狀態(tài)。使用消毒劑清潔操作區(qū)域，并穿戴合適個人防護設(shè)備，如穿戴無菌手套等。

  2、選擇合適的培養(yǎng)基

  根據(jù)細胞類型不同選擇合適的培養(yǎng)基，查閱文獻或參考ATCC等細胞庫的建議，選擇適合目標細胞的培養(yǎng)基配方。同時也要確保培養(yǎng)基和補充物質(zhì)配方適合目標細胞類型，并檢查過期日期和存儲條件。

  3、細胞密度控制

  細胞密度對細胞生長和功能有重要影響。細胞密度過高會導(dǎo)致細胞過度接觸和競爭，影響細胞生長；細胞密度過低會導(dǎo)致細胞生長緩慢。因此，根據(jù)細胞類型和實驗要求控制細胞密度，通常通過細胞計數(shù)儀或顯微鏡進行細胞計數(shù)。

  4、注意細菌污染

  在細胞培養(yǎng)過程，需要定期檢查細胞是否受到細菌、真菌和病毒等污染?？梢酝ㄟ^細菌培養(yǎng)、真菌培養(yǎng)和PCR等方法進行檢測。如發(fā)現(xiàn)細菌和真菌污染，需立即采取措施，例如更換培養(yǎng)器皿，使用抗生素或抗真菌藥物等。同時，也要注意實驗室清潔和消毒，以預(yù)防細胞污染的發(fā)生。

  5、實驗記錄

  準確記錄培養(yǎng)細胞的信息，包括來源、處理方法、傳代次數(shù)及細胞密度等。這些記錄對于實驗結(jié)果的解釋和后續(xù)研究非常重要。

  上述是對原代細胞培養(yǎng)有哪些步驟進行介紹，僅供參考！細節(jié)決定成敗，細菌、真菌、支原體、黑膠蟲，個個都是細胞殺手，在進行細胞培養(yǎng)之前要了解注意事項，爭取把實驗一次性做好。