ELISA如何判斷實驗結(jié)果的質(zhì)量

  當(dāng)拿到ELISA試劑盒，我們會對目標樣本進行檢測，對于初步實驗小伙伴們，ELISA如何判斷實驗結(jié)果的質(zhì)量？ELISA實驗經(jīng)常用于對復(fù)雜混合物中的特定蛋白進行檢測和定量分析，結(jié)果出來后需要一定的方法來評估數(shù)據(jù)是否可靠，主要從以下幾個方面評估：批內(nèi)精密度、稀釋線性、回收率、靈敏度（檢測限）等。

  內(nèi)部檢測準確度

  ELISA的批內(nèi)準確度是指在同一批實驗（同一塊酶標板、相同試劑、儀器和操作者）中，對同一樣本進行多次重復(fù)測量（例如，雙孔或三孔）結(jié)果的一致性。通常使用變異系數(shù)（%CV）來評估批內(nèi)準確度，其計算方法為：(標準差/平均值)*100%。一般來說，%CV值越小，表示重復(fù)性越好，結(jié)果越可靠。雖然%CV小于10%通常被認為是可接受的，但具體可接受的范圍取決于具體的實驗要求和ELISA試劑盒的特性。

  注意：CV大的原因可能有：

  1.移液不準確。使用前請確保移液器吸頭牢固地安裝在移液器上，以確保吸取正確的液體量；

  2.試劑濺入其他孔中；

  3.樣品或試劑被細菌或真菌污染；

  4.試劑之間交叉污染；整個酶標板的溫度不一致。這可以通過將酶標板放在遠離氣流的恒溫環(huán)境中5.孵育來避免；

  6、有些孔完全干燥。這就要求在孵育過程中微量滴定板需要始終蓋上蓋子。

  稀釋線性

  稀釋線性是指樣品在經(jīng)過一系列稀釋后，測得的濃度值與稀釋倍數(shù)呈線性關(guān)系。理想情況下，將樣品稀釋后，測得的濃度值應(yīng)與稀釋倍數(shù)成反比。例如，將樣品稀釋2倍，測得濃度值應(yīng)為原濃度值的一半；稀釋4倍，測得濃度值應(yīng)為原濃度值的四分之一，以此類推。通過繪制稀釋倍數(shù)和測得濃度值的曲線圖，可以評估樣品的稀釋線性。良好的稀釋線性表現(xiàn)為一條直線，表明在該稀釋范圍內(nèi)，測定方法的準確性和可靠性較高。

  基質(zhì)效應(yīng)會影響稀釋線性。當(dāng)存在基質(zhì)干擾時，樣品稀釋可以降低基質(zhì)的濃度，從而減弱其對測量結(jié)果的干擾。因此，評估稀釋線性也有助于判斷基質(zhì)效應(yīng)的存在和程度。如果樣品在不同稀釋倍數(shù)下的測量結(jié)果偏離線性關(guān)系，則可能存在基質(zhì)效應(yīng)。

  回收率

  回收率用于評估樣品基質(zhì)對目標物質(zhì)檢測的影響以及方法的準確性。它是通過在樣品中加入已知濃度的標準物質(zhì)（加標），然后測定加標后樣品中目標物質(zhì)的濃度來確定的?；厥章?/span>(%)=[(加標樣品測定值-未加標樣品測定值)/加標量]*100%。理想的回收率是100%。雖然80%-120%通常被認為是可接受的范圍，但具體可接受的范圍需要根據(jù)具體的實驗和分析物的特性來確定。如果回收率過高或過低，說明樣品基質(zhì)對目標物質(zhì)的檢測存在干擾，例如基質(zhì)抑制或基質(zhì)增強效應(yīng)。例如，在空白血清中加入已知濃度的IL-2，如果回收率低于預(yù)期，則提示血清中存在干擾因素，影響了抗體與IL-2的結(jié)合。

  靈敏度（檢測限）

  靈敏度是指分析方法能夠區(qū)分開的最低分析物水平，通常用檢測限(LOD)和定量限(LOQ)來表示。

  1.空白限值(LOB):指的是在重復(fù)測量空白樣品時，以一定概率（通常為95%）觀察到的最大測量值。LOB反映了背景噪音的水平。

  2、檢測限(LOD):指的是能夠以一定置信度（通常為95%）與空白樣品區(qū)分開的最低可檢測分析物濃度。

  3.定量限(LOQ):指的是能夠在滿足預(yù)定的準確度和精密度要求的前提下，可靠定量的最低分析物濃度。LOQ通常高于LOD。

  LOD和LOQ的確定通?；趯Φ蜐舛葮悠泛涂瞻讟悠返闹貜?fù)測量，并結(jié)合統(tǒng)計學(xué)方法進行計算。它們之間的關(guān)系可以用信號與噪音的比喻來理解：LOD是信號勉強能從噪音中區(qū)分出來的水平，而LOQ是信號足夠強，可以進行可靠定量的水平。

  信噪比

信噪比(Signal-to-NoiseRatio,S/N)是衡量信號強度相對于背景噪聲強度的指標。在分析化學(xué)中，信噪比越高，表明分析方法的靈敏度越高，更容易區(qū)分信號和噪聲。

上述是ELISA判斷實驗結(jié)果質(zhì)量的幾個指標。掌握這些實驗指標，在未來進行ELISA實驗來判斷實驗結(jié)果的好壞。