ELISA實(shí)驗(yàn)做完了，數(shù)據(jù)結(jié)果咋解讀？看這里！

酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）是一種常用免疫學(xué)檢測(cè)方法，基于抗原抗體特異性反應(yīng)原理，定性或定量檢測(cè)特定目標(biāo)分子來獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果。那么，ELISA數(shù)據(jù)結(jié)果如何判斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果的好壞？評(píng)估ELISA數(shù)據(jù)好壞的關(guān)鍵在于以下四個(gè)方面：

檢測(cè)內(nèi)精度

檢測(cè)內(nèi)精度是指在同一次實(shí)驗(yàn)中，對(duì)相同樣本在同一塊酶標(biāo)板上進(jìn)行多次重復(fù)測(cè)定（例如，至少3-5次）所得到結(jié)果一致。通常用變異系數(shù)（CV）來評(píng)估，CV=標(biāo)準(zhǔn)差/平均數(shù)。每個(gè)樣品的CV值應(yīng)小于10%，較低的CV值代表更好的重復(fù)性。CV值越高（例如超過10%），則提示孔與孔之間差異較大，重復(fù)性不好，結(jié)果可靠性較低。CV值大的原因可能包括移液不準(zhǔn)確、試劑濺入其他孔中、樣本或試劑受污染、酶標(biāo)板溫度不一致等。

稀釋線性度

稀釋線性度是指樣品在被稀釋后，測(cè)得的濃度與預(yù)期濃度之間呈線性關(guān)系的程度，它反映了方法在不同濃度范圍內(nèi)的準(zhǔn)確性和可靠性。通常用回收率來評(píng)估，即測(cè)量值與預(yù)期值的比值。理想情況下，在不同稀釋倍數(shù)下，回收率應(yīng)該保持一致，并在可接受的范圍內(nèi)(例如，80%-120%，或在方法驗(yàn)證中預(yù)先設(shè)定的范圍內(nèi))。

在沒有顯著基質(zhì)干擾的情況下，稀釋倍數(shù)的改變理論上不應(yīng)顯著影響測(cè)量值。然而，基質(zhì)效應(yīng)的存在會(huì)使測(cè)量結(jié)果偏離線性關(guān)系?；|(zhì)效應(yīng)是指樣品中除目標(biāo)分析物以外的成分對(duì)測(cè)量結(jié)果產(chǎn)生的干擾，它可以導(dǎo)致測(cè)量值偏高或偏低。當(dāng)樣品被稀釋時(shí)，基質(zhì)成分也被稀釋，從而可能改變基質(zhì)效應(yīng)的程度，導(dǎo)致測(cè)量值隨稀釋倍數(shù)的改變而發(fā)生非線性的變化。

回收率

回收率是指在樣品中添加已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)后，實(shí)際測(cè)得的濃度與添加濃度的比值，通常用百分比表示。它用于評(píng)估樣品基質(zhì)對(duì)目標(biāo)物質(zhì)檢測(cè)的影響。例如，待測(cè)上清液中存在的大量蛋白質(zhì)等基質(zhì)成分可能會(huì)干擾抗原抗體反應(yīng)，降低信噪比，導(dǎo)致目標(biāo)物質(zhì)的測(cè)量濃度低于實(shí)際值（基質(zhì)抑制效應(yīng)）。

回收率實(shí)驗(yàn)通常分為加標(biāo)回收率和提取回收率。通過將已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)加入到不同的樣品基質(zhì)中，然后進(jìn)行檢測(cè)，可以計(jì)算出回收率。如果平均回收率在可接受的范圍內(nèi)（例如，80%-120%，或在方法學(xué)驗(yàn)證中預(yù)先設(shè)定的范圍內(nèi)），則認(rèn)為樣品基質(zhì)對(duì)檢測(cè)準(zhǔn)確定量分析物的能力影響較小。

靈敏度（檢測(cè)限）

分析方法的靈敏度是指響應(yīng)量的變化與引起該變化的待測(cè)物質(zhì)濃度或量之比。在實(shí)際應(yīng)用中，常用檢測(cè)限來表示靈敏度。檢測(cè)限是指在規(guī)定的置信水平（通常為95%）下，能夠被檢測(cè)到的最低分析物濃度。常用的檢測(cè)限指標(biāo)包括LOB、LOD和LOQ：

• LOB(LimitofBlank):在規(guī)定的置信水平（通常為95%）下，從一系列空白樣本測(cè)量結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析中得到的最高表觀分析物濃度。
• LOD(LimitofDetection):在規(guī)定的置信水平（通常為95%）下，能夠被檢測(cè)到的最低分析物濃度。此時(shí)，分析物產(chǎn)生的信號(hào)能夠與背景噪音區(qū)分開，但并不一定能夠準(zhǔn)確定量。
• LOQ(LimitofQuantitation):在規(guī)定的置信水平（通常為95%）下，能夠被準(zhǔn)確定量的最低分析物濃度。在LOQ及以上濃度，測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度都滿足預(yù)定的要求。

在ELISA實(shí)驗(yàn)中，準(zhǔn)確評(píng)估數(shù)據(jù)質(zhì)量至關(guān)重要。通過綜合運(yùn)用檢測(cè)內(nèi)精度、稀釋線性度、回收率和靈敏度等指標(biāo)，研究者可以有效判斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，并為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供指導(dǎo)。