昆蟲卵巢細(xì)胞
基本形態(tài) : 上皮細(xì)胞樣
培養(yǎng)條件 : Grace's Insect Medium (GIMw/o BSA, FCS, Whole EggUltrafiltrate) 10%FBS
生長特性 : 貼壁/懸浮混合生長
培養(yǎng)環(huán)境 : 28℃,100%AIR
備 注 : 該細(xì)胞系源于雌性草地貪夜蛾蛹的卵巢組織,可以用于復(fù)制桿狀病毒表達載體
T25 細(xì)胞到貨處理
觀察:
1、收到細(xì)胞后,請及時核對培養(yǎng)瓶上標(biāo)注的細(xì)胞名稱是否與訂購的細(xì)胞名稱一致以及培養(yǎng)瓶是否有破損或漏液等異常情況。
處理:
1、75%酒精棉球擦拭 T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。
2、顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進行不同倍數(shù)拍照保存(40x,100x,200x 各一張)前三天照片為重要售后依據(jù),不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。
3、不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞放入 28 度培養(yǎng)箱中靜置 3-4 小時后再做處理,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
4、收到細(xì)胞后,及時查看說明書是貼壁細(xì)胞還是懸浮細(xì)胞形態(tài),并按常規(guī)貼壁或懸浮細(xì)胞的傳代方法操作。
貼壁:
未超過 80%匯合度時,將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中,留 5ml 完全培養(yǎng)基,放入 28℃ 孵箱培養(yǎng);超過 80%匯合度時,根據(jù)情況傳代或者凍存,具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。首次傳代,建議 1:2 傳代(兩個 T25)。(傳代時建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基,進行對比培養(yǎng)。)
特殊細(xì)胞注意事項:
個別細(xì)胞貼壁不牢,在運輸過程中發(fā)生細(xì)胞脫落,這是正?,F(xiàn)象。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管,1000rpm 離心 5min,收集上清(后期對比培養(yǎng)使用),沉淀加入胰酶 1-2ml,輕輕吹打,重懸,消化至細(xì)胞滑落后,加 5ml 完全培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心,棄上清,加 1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸。然后按 1:2 比例進行分瓶傳代(兩個 T25),補充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶,最后放入 28℃,100%AIR 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。