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021-54845833/15800441009
細(xì)胞名稱 : HEP-53.4 小鼠肝癌細(xì)胞
細(xì)胞別名 : HEP-53.4 ; 53.4 ; 小鼠肝癌細(xì)胞
細(xì)胞來(lái)源 : 德國(guó)
細(xì)胞鑒定 : STR鑒定已通過(guò)
細(xì)胞形態(tài) : 上皮樣細(xì)胞，貼壁生長(zhǎng)
培 養(yǎng) 基 : DMEM(含NaHCO3 1.5g/L)(BasMed-AW-013)+FBS 10% + P/S1%
培養(yǎng)條件 : 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%
凍存條件 : 無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
細(xì)胞背景 : 來(lái)源于 C57BL/6J小鼠的原發(fā)性肝細(xì)胞癌，這些小鼠肝細(xì)胞忠實(shí)地代表了肝細(xì)胞癌，并為研究這種類型的肝癌提供了有價(jià)值的模型，同義詞HEP-53.4和53.4，它們便于識(shí)別和交叉引用，肝細(xì)胞癌是一個(gè)重大的健康問(wèn)題，這些細(xì)胞能夠?qū)ζ浞肿油贰⒓?xì)胞相互作用和治療策略進(jìn)行精確研究，這些細(xì)胞起源于Mus musculus(小鼠)，為理解和開(kāi)發(fā)肝細(xì)胞癌的治療方法提供了相關(guān)的模型系統(tǒng)。
細(xì)胞用途 : 僅供科研使用
細(xì)胞貨期 : 現(xiàn)貨，1周左右
注意事項(xiàng)
1. 常規(guī)消化收集細(xì)胞離心。
2. 離心后去掉離心管內(nèi)上清，加入1ml左右胰酶重懸細(xì)胞混勻，建議輕輕晃動(dòng)或者輕輕吹打細(xì)胞， 放入培養(yǎng)箱消化細(xì)胞，再消化1min左右。
3. 消化好后，用移液槍輕輕吹打細(xì)胞懸液，使細(xì)胞團(tuán)分散，迅速加入3-5ml含血清的培養(yǎng)基混勻以終止消化，離心去除胰酶。
4. 加入5ml左右的細(xì)胞相應(yīng)的完全培養(yǎng)基混勻，按比例接入培養(yǎng)瓶/皿中。
5. 顯微鏡下觀察看細(xì)胞是否成均勻分散的單細(xì)胞，若有少量成團(tuán)的小細(xì)胞團(tuán)可不用重新消化，使之貼壁后待細(xì)胞生長(zhǎng)穩(wěn)定后再消散細(xì)胞。
常溫發(fā)貨
收到后T25瓶消毒再放置培養(yǎng)箱靜置2-3小時(shí)后觀察密度和狀態(tài)拍照2-3張反饋給銷售，密度達(dá)標(biāo)就可以傳代。前期傳代比例1:2，等再次長(zhǎng)滿后傳代時(shí)建議凍存其中一整瓶成1個(gè)1ml凍存管，另外一瓶繼續(xù)傳代，反復(fù)凍存2-3只后才擴(kuò)增做實(shí)驗(yàn)，以防突發(fā)情況引起斷種。
收到后T25瓶消毒再放置培養(yǎng)箱靜置2-3小時(shí)后觀察密度和狀態(tài)拍照2-3張反饋給銷售，密度達(dá)標(biāo)就可以傳代。前期傳代比例1:2，等再次長(zhǎng)滿后傳代時(shí)建議凍存其中一整瓶成1個(gè)1ml凍存管，另外一瓶繼續(xù)傳代，反復(fù)凍存2-3只后才擴(kuò)增做實(shí)驗(yàn)，以防突發(fā)情況引起斷種。
干冰發(fā)貨
常規(guī)細(xì)胞發(fā)貨凍存管2只，復(fù)蘇1只，另外一只備用，第一個(gè)復(fù)蘇不成功時(shí)嚴(yán)格按照廠家要求復(fù)蘇第二個(gè)，均沒(méi)有復(fù)蘇成功的情況即時(shí)留存復(fù)蘇照片通知我們。
常規(guī)細(xì)胞發(fā)貨凍存管2只，復(fù)蘇1只，另外一只備用，第一個(gè)復(fù)蘇不成功時(shí)嚴(yán)格按照廠家要求復(fù)蘇第二個(gè)，均沒(méi)有復(fù)蘇成功的情況即時(shí)留存復(fù)蘇照片通知我們。
貼壁細(xì)胞
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加入0.25％(w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶/6cm培養(yǎng)皿中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶/6cm培養(yǎng)皿中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
4. 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。
5. 運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。
5. 運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。
懸浮細(xì)胞
懸浮狀態(tài)下生長(zhǎng)的細(xì)胞，可以通過(guò)向培養(yǎng)瓶中添加完全培養(yǎng)基來(lái)維持細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，一般情況下細(xì)胞密度維持在1×10?~1×10?個(gè)/mL(不同細(xì)胞對(duì)密度要求不同）可以維持細(xì)胞的正常生長(zhǎng)。如需分瓶可以將細(xì)胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:4的比例進(jìn)行。
運(yùn)輸形式
低溫 ：1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
常溫 :T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
生物安全
1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒(méi)在液氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。
特別注意
該細(xì)胞在DMEM(含1.5g/LNaHCO3)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好，大部分的DMEM含有較高濃度的NaHCO3（3.7g/L），若使用DMEM（3.7g/L NaHCO3）培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)需要提高CO2濃度（7%-10%）。