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021-54845833/15800441009
基本信息
產(chǎn)品品牌 ：通蔚生物
中文名稱 ：小鼠成纖維細胞
細胞簡稱 ： PA 317
細胞形態(tài) ： 成纖維細胞樣
生長特性 ： 貼壁細胞
培養(yǎng)環(huán)境 ： 空氣，95% ；CO2，5% 37℃
凍存條件 ： 55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40% FBS+5% D M SO液氮
完全培養(yǎng)基 ： DM EM (PM 150210)＋10% F B S(164210-50)＋1% P /S(P B 180120)
傳代步驟
1、吸出原培養(yǎng)液。
2、加入2ml左右PBS，輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞,吸出PBS丟棄。
3、加入1ml左右0.25% 胰蛋白酶溶液（含ED TA ），輕輕晃動培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細胞。
4、放入培養(yǎng)箱消化，顯微鏡下看到細胞塊中間的細胞明顯變圓有間隙時可終止，全程不要拍打培養(yǎng)瓶。
5、加入3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，吹打細胞使之脫壁并在液體里反復(fù)吹打使細胞盡量呈單顆細胞的懸浮液。
6、收集細胞懸液離心，1200rpm /min 3分鐘，離心完吸出上清丟棄。
7、加入新鮮培養(yǎng)基，吹打幾下混勻細胞即可，按比例接種到新培養(yǎng)瓶，補足培養(yǎng)基，擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進行培養(yǎng)。
傳代比例（密度） ： 1:3-1:4
換液頻次 ： 2~ 3次/周
細胞背景描述
PA 317細胞源自TK -N IH /3T3細胞，通過pBR322中的包裝結(jié)構(gòu)D N A (pPAM 3)和pBR322中的單純皰疹病毒胸苷激酶基因共同轉(zhuǎn)染構(gòu)建而成。通過感染或轉(zhuǎn)染將逆轉(zhuǎn)錄病毒載體導(dǎo)入這些細胞，結(jié)果生成可以感染許多哺乳動物細胞的雙嗜性載體顆粒。PA317細胞生成的病毒顆粒已成功地用于將基因?qū)肴祟?，可能因為用于?gòu)建PA317細胞而轉(zhuǎn)入的D N A 丟失，能夠包裝逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的PA 317細胞百分比隨傳代而減少。在含0.03m M 次黃嘌呤、0.001m M 氨甲喋呤和0.02m M 胸苷的培養(yǎng)基中短暫(大約5天)選擇，可以選出保留了包裝功能的細胞。選擇后，PA 317細胞應(yīng)在H T培養(yǎng)基(0.03m M 次黃嘌呤、0.02m M 胸苷)中培養(yǎng)4天，以稀釋殘留的氨甲喋呤，此后PA317細胞不需選擇可以穩(wěn)定至少1個月。
供體年齡 ： 胚胎
組織來源 ： 胚胎
細胞類型 ： 轉(zhuǎn)化細胞系
生物安全等級 ： 1
細胞保藏中心 ： ATCC ; C RL-9078EC AC C ; 89032007
收到常溫細胞后如何處理
細胞培養(yǎng)詳細操作步驟請參照通蔚生物細胞培養(yǎng)操作指南
1. 收到常溫細胞后，及時拍照記錄有無漏液/瓶身破損現(xiàn)象。
2. 用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4. 靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片 將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5. 若觀察到異常或者對細胞有疑問，請及時跟我們聯(lián)系；對于細胞培養(yǎng)操作及培養(yǎng)。可跟我們的技術(shù)支持交流。
