產品簡介
產品名稱 :小鼠胚胎干細胞
產品品牌 :通蔚生物
組織來源 :囊胚
產品規(guī)格 :5×105cells/T 25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介
小鼠胚胎干細胞分離自囊胚胚胎組織。胚胎干細胞(Em bryonic stem cell,ESC s,簡稱E
S、E K 或E SC 細胞) 是早期胚胎(原腸胚期之前) 或原始性腺中分離出來的一類細胞,它具有體外培養(yǎng)無限增殖、自我更新和多向分化的特性。無論在體外還是體內環(huán)境,ES細胞都能被誘導分化為機體幾乎所有的細胞類型。
進一步說,胚胎干細胞(ES細胞) 是一種高度未分化細胞。它具有發(fā)育的全能性,能分化出成體動物的所有組織和器官,包括生殖細胞。ES細胞具有與早期胚胎細胞相似的形態(tài)結構,細胞核大,有一個或幾個核仁,胞核中多為常染色質,胞質胞漿少,結構簡單。體外培養(yǎng)時,細胞排列緊密,呈集落狀生長。用堿性磷酸酶染色,ES細胞呈棕紅色,而周圍的成纖維細胞呈淡黃色。
細胞克隆和周圍存在明顯界限,形成的克隆細胞彼此界限不清,細胞表面有折光較強的脂狀小滴。細胞克隆形態(tài)多樣,多數呈島狀或巢狀。小鼠ES細胞的直徑7微米~18微米,豬、牛、羊ES細胞的顏色較深,直徑12微米~18微米。胚胎干細胞與普通細胞有顯著差別,有其特定的生長特性和特定的標志,例如堿性磷酸酶活性非常高,帶有胚胎階段特異性表面抗原( Stage- specificem bryonic antigen s,SSE A ) ,人類胚胎干細胞還帶有高分子量的糖蛋白T R A 1-60、T R A -1-81等標志,這些特性和標志均可以用于對胚胎干細胞進行鑒定,除此之外,胚胎干細胞還可以在體外永久傳代,并保持正常核型。
在體外培養(yǎng)體系中加入分化抑制劑如白血病抑制因子(Leukaemiainhibitory factor,LF) 或者在小鼠胚胎成纖維細胞飼養(yǎng)層(M EF) 上培養(yǎng)時,胚胎干細胞都能呈克隆性增殖,長期保持核型正常和穩(wěn)定,凍存解凍也不影響不分化的特性。
另外,胚胎干細胞還表現岀高水平端粒酶活性,目前證明端粒酶與細胞衰老密切相關,多數成熟細胞的端粒酶活性都很低。這些都是胚胎干細胞與成熟細胞不同的重要特點,也可能是其復制生命期限遠比體細胞長的原因。
方法簡介
通蔚生物實驗室分離的小鼠胚胎干細胞采用分離囊胚組織,去除胚胎透明帶、使用特制專用培養(yǎng)基篩選培養(yǎng),胰酶消化傳代純化制備而來,細胞總量約為5×105cells/瓶。
質量檢測
通蔚生物實驗室分離的小鼠胚胎干細胞經O ct-4免疫熒光鑒定,純度可達90% 以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
包被條件 :明膠(0. 1%)
培 養(yǎng) 基 :含LIF、BM P、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 :每2-3天換液一次
生長特性 :貼壁
細胞形態(tài) :短梭形、多角形
傳代特性 :可傳3-5代左右
傳代比例 :1:2
消 化 液 :0. 025% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 :氣相:空氣,95% 。C O2,5%
小鼠胚胎干細胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片
使用方法
小鼠胚胎干細胞是一種貼壁細胞,細胞形態(tài)呈短梭形、多角形,在通蔚生物技術部標準操作流程下,細胞可傳3-5代左右。建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作。
1. 取出T 25細胞培養(yǎng)瓶,用75% 酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0. 025% 胰蛋白酶消化液或者專用消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中,輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5m L,置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細胞完全貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時,需要對實驗器皿進行包被,以增強細胞貼壁性,避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0. 1m g/m l),明膠(0. 1% ),依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和通蔚生物技術部溝通。由于運輸的原因,個別敏感細胞會出現不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。