人骨髓樹突狀細(xì)胞(未成熟DC細(xì)胞)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
產(chǎn)品名稱 : 人骨髓樹突狀細(xì)胞(未成熟DC細(xì)胞)
產(chǎn)品品牌 : 通蔚生物
組織來(lái)源 : 骨髓
產(chǎn)品規(guī)格 : 5×105cells/T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡(jiǎn)介
人骨髓樹突狀細(xì)胞分離自骨髓;骨髓是機(jī)體的造血組織,位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動(dòng)物的骨髓分兩種:紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細(xì)胞、血小板和各種白細(xì)胞。血小板有止血作用,白細(xì)胞能殺滅與抑制各種病原體,包括細(xì)菌、病毒等;某些淋巴細(xì)胞能制造抗體。因此,骨髓不但是造血器官,它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長(zhǎng)骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中,是一種海綿狀的組織,能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色,稱為紅骨髓。出生時(shí),紅骨髓充滿全身骨髓腔,隨著年齡增大,脂肪細(xì)胞增多,相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代,最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。
骨髓D C 細(xì)胞是由骨髓單核細(xì)胞誘導(dǎo)而成的;樹突狀細(xì)胞分為成熟樹突狀細(xì)胞和未成熟樹突狀細(xì)胞,典型的未成熟樹突狀細(xì)胞呈半貼壁生長(zhǎng),在G M -C SF、IL4的作用下形成葡萄串樣集落,細(xì)胞大而形態(tài)不規(guī)則,表面皺褶多,亦可見(jiàn)少量短刺狀突,胞內(nèi)細(xì)胞器豐富并可見(jiàn)吞噬泡,具有較強(qiáng)的遷移能力,伴隨有部分未完全誘導(dǎo)成的單核細(xì)胞,貼壁形態(tài)多樣。而成熟的樹突狀細(xì)胞由未成熟D C 進(jìn)一步經(jīng)T N Fα、LPS等誘導(dǎo)而成,多數(shù)呈懸浮生長(zhǎng),細(xì)胞呈圓形,細(xì)胞體積進(jìn)一步增大,表面大量粗細(xì)不等的樹枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 ),伴隨少量貼壁未成熟細(xì)胞或者單核細(xì)胞。未成熟D C 細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)也可能導(dǎo)致自發(fā)分化成熟。
D C 細(xì)胞尚無(wú)特異性細(xì)胞表面分子標(biāo)志,主要通過(guò)形態(tài)學(xué)、組合性細(xì)胞表面標(biāo)志、在混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)中能激活初始T細(xì)胞等特征進(jìn)行鑒定。其中成熟樹突狀細(xì)胞表面高表達(dá)主要組織相容性復(fù)合物(M H C )以及C D 80、C D 86等共刺激分子,進(jìn)而激活 T淋巴細(xì)胞,誘導(dǎo)免疫應(yīng)答,處于啟動(dòng)、調(diào)控、并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié);未成熟樹突狀細(xì)胞具有很強(qiáng)的抗原攝取加工能力,但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細(xì)胞活化、增殖產(chǎn)生免疫應(yīng)答,不能激活T細(xì)胞的第二信號(hào),可導(dǎo)致T細(xì)胞無(wú)能,從而誘導(dǎo)免疫低反應(yīng)或抗原免疫特異性耐受。未成熟樹突狀細(xì)胞表面C D 80、C D 86、M H C -Ⅱ類分子等共刺激分子表達(dá)較低,一般在30% 以下。
方法簡(jiǎn)介
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的人骨髓樹突狀細(xì)胞(未成熟D C 細(xì)胞)采用密度梯度離心法分離骨髓單個(gè)核細(xì)胞、培養(yǎng)過(guò)程添加細(xì)胞因子誘導(dǎo)而來(lái),細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的人骨髓樹突狀細(xì)胞(未成熟D C 細(xì)胞)經(jīng)C D 86免疫熒光鑒定、細(xì) 胞形態(tài)等綜合鑒定,純度可達(dá)80% 以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 : 含F(xiàn)BS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 : 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 : 半貼半懸浮
細(xì)胞形態(tài) : 圓形、梭形、多角形,形態(tài)多樣
傳代特性 : 于高度分化細(xì)胞;屬于不增殖細(xì)胞群
傳代比例 : 不傳代
消 化 液 : 0.25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 : 氣相:空氣,95% ;C O2,5%
人骨髓樹突狀細(xì)胞(未成熟D C 細(xì)胞)體外培養(yǎng)周期有限;建議使用通蔚生物配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片
使用方法
人骨髓樹突狀細(xì)胞(未成熟D C 細(xì)胞)是一種半貼半懸浮細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)呈圓形、梭形 、多角形,形態(tài)多樣,在通蔚生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,細(xì)胞屬于高度分化細(xì)胞;屬于不增殖細(xì)胞群;建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1.取出T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75% 酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2.半貼壁半懸浮細(xì)胞處理
1) 收集T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基至50ml離心管中,用吸管吸取PBS,吹洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶1-2次,收集清洗液;經(jīng)1200-1500rpm 離心3min,棄上清,收集細(xì)胞沉淀①。
2) 添加0.25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后,再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,收集細(xì)胞懸液至離心管中;經(jīng)1200-1500rpm 離心3min,棄上清,收集細(xì)胞沉淀②。
4) 吸取5ml新鮮完全培養(yǎng)基,重懸細(xì)胞沉淀①、細(xì)胞沉淀②,把①、②混勻。
5) 用吸管輕輕吹打混勻、分散細(xì)胞,按實(shí)驗(yàn)需求接種于實(shí)驗(yàn)器皿內(nèi),然后補(bǔ)充適量新鮮的完全培養(yǎng)基,置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
6) 待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后,用于實(shí)驗(yàn);可以每2-3天換液一次新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時(shí),需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,避免細(xì)胞因沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn);包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1m g/m l),明膠(0.1% ),依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被。
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和通蔚生物技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑?,個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問(wèn)題得到解決。