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產(chǎn)品中心

  • 大鼠胰腺星狀細(xì)胞

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    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號 : TW32564
    • 應(yīng)用 : 僅供科研使用
    • 保存條件 : 低溫保存
    • 貨期 : 現(xiàn)貨
    • 商品庫存:100
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產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品名稱 :大鼠胰腺星狀細(xì)胞
產(chǎn)品品牌 :通蔚生物
組織來源 :胰腺組織
產(chǎn)品規(guī)格 :5×105cells/T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

細(xì)胞簡介
大鼠胰腺星狀細(xì)胞分離自胰腺組織。胰腺分為外分泌腺和內(nèi)分泌腺兩部分。外分泌腺由腺泡和腺管組成,腺泡分泌胰液,腺管是胰液排出的通道。胰液中含有碳酸氫鈉、胰蛋白酶原、脂肪酶、淀粉酶等。胰液通過胰腺管排入十二指腸,有消化蛋白質(zhì)、脂肪和糖的作用。

內(nèi)分泌腺由大小不同的細(xì)胞團──胰島所組成,胰島主要由4種細(xì)胞組成:α細(xì)胞、β細(xì)胞、γ細(xì)胞及PP細(xì)胞。α細(xì)胞分泌胰高血糖素,升高血糖。β細(xì)胞分泌胰島素,降低血糖。γ細(xì)胞分泌生長抑素,以旁分泌的方式抑制α、β細(xì)胞的分泌。PP細(xì)胞分泌胰多肽,抑制胃腸運動、胰液分泌和膽囊收縮。

纖維化是慢性胰腺炎的典型病理特征,活化的胰腺星狀細(xì)胞(PSC ) 是胰腺纖維化的主要效應(yīng)細(xì)胞,PSC 分離和成功培養(yǎng)是體外研究胰腺纖維化的重要前提。未活性化的PSC 胞漿中富含維A 脂滴,并表達D esmin蛋白,活化后的PSC則表達α-平滑肌肌動蛋白(alp h a-SM A ) 。

PSC 具有靜息態(tài)與激活態(tài)兩種,并分別具有特異的標(biāo)志物。靜息狀態(tài)PSC 胞質(zhì)內(nèi)富含的維生素A 脂滴可以被油紅O 染成紅色,陽性表達D esmin。激活狀態(tài)PSC 陽性表達alp h a-SM A 。油紅O 染色發(fā)現(xiàn),原代分離的細(xì)胞培養(yǎng)6d,胞漿中仍可見明顯的脂滴,傳代后,橙紅色的脂滴顆粒顯著減少甚至消失。

免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示,細(xì)胞接種24h仍然表達D esmin,48h后D esmin基本不再表達。培養(yǎng)48h后絕大多數(shù)細(xì)胞開始表達alp h a-SM A,隨著培養(yǎng)時間的增長和傳代次數(shù)的增加,細(xì)胞表達alp h a-SM A,而不再表達D esmin,說明細(xì)胞活化。提示PSC接種24h后即啟動了激活過程,至培養(yǎng)第6d大多數(shù)細(xì)胞激活,傳代后細(xì)胞處于高度激活狀態(tài)。

原代胰腺星狀細(xì)胞可作為慢性胰腺炎新藥的細(xì)胞篩選模型,目前研究發(fā)現(xiàn):胰腺受損時,在各種刺激因子作用下使胰腺星狀細(xì)胞活化,導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)、功能發(fā)生變化,促使基質(zhì)增生、膠原蛋白的大量生成及不規(guī)則沉積。

方法簡介
通蔚生物實驗室分離的大鼠胰腺星狀細(xì)胞采用膠原酶制備而來,細(xì)胞總量約為5×10 5cells/瓶。

質(zhì)量檢測
通蔚生物實驗室分離的大鼠胰腺星狀細(xì)胞經(jīng)α-SM A、D esmin免疫熒光鑒定,純度可達90% 以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息
培 養(yǎng)  基 :含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 :每2-3天換液一次
生長特性 :貼壁
細(xì)胞形態(tài) :成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 :可傳2-3代
傳代比例 :1:2
消 化  液 :0. 25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 :氣相 :空氣,95% 。C O2,5%
大鼠胰腺星狀細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時發(fā)送細(xì)胞電子版照片

使用方法
大鼠胰腺星狀細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)呈成纖維細(xì)胞樣,在通蔚生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,細(xì)胞可傳2-3代。建議您收到細(xì)胞后盡快進行相關(guān)實驗。
客戶收到細(xì)胞后,請按照以下方法進行操作。
1. 取出T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75% 酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次。
2) 添加0. 25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后,再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5m L,置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細(xì)胞完全貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞實驗
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時,需要對實驗器皿進行包被,以增強細(xì)胞貼壁性,避免細(xì)胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0. 1m g/m l),明膠(0. 1% ),依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。

注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和通蔚生物技術(shù)部溝通。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。