中文名稱: 免疫組化試劑盒(適用于兔/小鼠一抗)
英文名稱: Immunohistochemistry Kit(Apply to rabbit or mouse primary antibody)
相關類別: 抗體相關支持試劑
儲 存: 冷藏(2-8℃)
概 述
該免疫組化試劑盒適用范圍為石蠟包埋組織切片,也可用于固定后的冰凍切片。
特 點
操作簡便:無需太多準備,拿到試劑盒既能開展試驗。 重現(xiàn)性好:實驗結果重復性高。
應 用
用于免疫組織化學實驗,兩種包裝分別可用于20張和50張切片。
使用說明
1. 組織固定:在脫蠟之前,將切片60°C恒溫箱中烘烤60分鐘。
2. 脫蠟:將切片用二甲苯浸泡10分鐘,更換二甲苯后再浸泡10分鐘。
3. 水化:分別用無水乙醇浸泡5分鐘;95%乙醇中浸泡5分鐘;85%乙醇中浸泡5分鐘;75%乙醇中浸泡5分鐘。
4. 洗滌:ddH2O浸泡5分鐘,清洗3次。
5. 抗原修復(煮沸法):壓力鍋中加入足以淹沒切片的10 mmol/L的枸櫞酸鹽緩沖液(pH 6.0)(配制:將復性劑溶于相應體積 ddH2O中,混勻),加熱至沸騰,切片置耐熱塑料切片架上,放入鍋中,蓋好鍋蓋,扣上壓力閥,繼續(xù)加熱,設置保壓3 min,時間到后打開放氣閥放氣,壓力歸零后開鍋蓋將內鍋取出放置室溫冷卻,待溶液冷卻至室溫后取出切片(約30 min)。
6. 洗滌:ddH2O浸泡5分鐘,清洗2次,PBST浸泡5分鐘,清洗2次。
7. 滅活酶:每張切片滴加50 μl滅活酶試劑,室溫避光處理15分鐘。
8. 洗滌:PBST浸泡5分鐘,清洗3次。(第一次迅速倒掉)
9. 封閉:每張切片滴加3% BSA-PBST 50 μl,濕盒中室溫封閉30分鐘。
10. 加一抗:棄去封閉液,每張切片滴加50 μl一抗,4℃濕盒中孵育過夜或37°C 1小時。
11. 復溫:次日取出切片,室溫復溫40分鐘。
12. 洗滌:PBST浸泡5分鐘,清洗3次。(第一次迅速倒掉)
13. 加酶標二抗:每張切片滴加HRP標記的二抗(抗兔/小鼠)25μl,室溫或37°C孵育30分鐘。
14. 洗滌:PBST浸泡5分鐘,清洗3次。(第一次迅速倒掉)
15. 顯色(DAB法):每張切片滴加50 μl顯色液(顯色液配制:85% ddH2O+ 5% DAB緩沖液+5% DAB底物+5% DAB色原,避光現(xiàn)配現(xiàn)用,按需要量配制),濕盒中顯色5分鐘。
16. 終止顯色:用蒸餾水終止顯色反應。
17. 復染:每張切片滴加50 μl蘇木素體細胞快速染色液,染色5分鐘 ,用蒸餾水沖洗干凈。
18. 脫色反藍:將切片放入1%鹽酸~乙醇中脫色3~5秒后迅速取出放入蒸餾水中終止,再放入PBST中反藍5分鐘。
19. 封片:分別在75%乙醇中浸泡5分鐘;85%乙醇中浸泡5分鐘;95%乙醇中浸泡5分鐘;無水乙醇中浸泡5分鐘。用二甲苯浸泡10分鐘,更換二甲苯后再浸泡10分鐘。之后在切片上加中性樹膠,加蓋玻片。
20. 觀察:顯微鏡。
組份
復性劑(溶解前請混勻) HRP標記的二抗(抗兔/小鼠) DAB緩沖液(20×) DAB底物(20×) DAB色原(20×) 蘇木素體細胞快速染色液