產(chǎn)品及特點(diǎn):
流產(chǎn)衣原體(Chlamydophila abortus)是綿羊地方性流產(chǎn)的主要病原,能夠引起感染母羊在妊娠期最后2周-3周內(nèi)出現(xiàn)流產(chǎn)、產(chǎn)死羔或足月產(chǎn)下存活不超過 48h 的虛弱羔羊。衣原體感染引起的妊娠晚期流產(chǎn)在世界許多養(yǎng)羊地區(qū),特別是在臨產(chǎn)期羊群密集的地區(qū)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。除綿羊外,流產(chǎn)衣原體感染山羊、牛、豬、馬等家畜同樣引起妊娠晚期流產(chǎn)。流產(chǎn)衣原體也能感染人,引起非典型肺炎和孕婦流產(chǎn)等,屬于人獸共患病病原。
本產(chǎn)品是根據(jù) PCR 原理開發(fā)的流產(chǎn)嗜衣原體檢測(cè)試劑盒,它具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供DNA模板。
2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化,專一性強(qiáng),只擴(kuò)增流產(chǎn)嗜衣原體,與其他病原沒有交叉反應(yīng)。
3. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料,PCR后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次,但只能用于科研。
規(guī)格及成分:
編號(hào) |
成分 |
規(guī)格 |
試劑一 |
PCR MagicMix 3.0 |
1 mL(紅蓋) |
試劑二 |
超純水 |
1 mL(亮黃色) |
試劑三 |
流產(chǎn)嗜衣原體 PCR 引物混合液 |
100 μL(白蓋) |
試劑四 |
流產(chǎn)嗜衣原體 PCR 陽(yáng)性對(duì)照(1×10E8 /μL) |
50 μL(黃蓋) |
試劑五 |
使用手冊(cè) |
1 份 |
低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為一年。陽(yáng)性對(duì)照需要單獨(dú)放置,不要污染其他試劑。
自備試劑:
樣品 RNA。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備:
1. 用自選方法純化N+2個(gè)樣品的DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容??梢赃x用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N個(gè)樣品,則需要做N+2個(gè)提取,包括一個(gè)樣品制備陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè)樣品制備陰性對(duì)照。樣品制備陽(yáng)性對(duì)照是在適量水(取決于試劑盒要求的樣品起始量)中加 10μL流產(chǎn)嗜衣原體PCR 陽(yáng)性對(duì)照的 1000 倍稀釋液而得,樣品制備陰性對(duì)照是直接用水。提取結(jié)束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)(40μL 體系):
3. 對(duì)N+2個(gè)樣品,在PCR時(shí)需要增加一個(gè)PCR陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè)PCR陰性對(duì)照,故需要設(shè)置N+4個(gè)反應(yīng)。在N+4個(gè)PCR管中分別加入下列成分:
成份 |
N+2 個(gè)樣品管 |
PCR 陰性對(duì)照 |
PCR陽(yáng)性對(duì)照 |
PCR Magic Mix 3.0 |
各 20μL |
20μL |
20μL |
流產(chǎn)嗜衣原體PCR 引物混合液 |
各2μL |
2μL |
2μL |
N+2個(gè)樣品DNA模板 |
各18μL |
-- |
-- |
PCR 陰性對(duì)照(水) |
-- |
18μL |
-- |
PCR 陽(yáng)性對(duì)照(流產(chǎn)嗜衣原體PCR陽(yáng)性對(duì)照1000倍稀釋液) |
-- |
-- |
18μL |
過程 |
溫度 |
時(shí)間 |
預(yù)變性 |
95℃ |
5 min |
PCR 反應(yīng)35個(gè)循環(huán) |
95℃ |
30 sec |
55℃ |
30 sec |
|
72℃ |
40 sec |
|
最后延伸 |
72℃ |
7 min |
5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣,不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽(yáng) 性對(duì)照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn),陰性對(duì)照必須無(wú)任何擴(kuò)增,否則實(shí) 驗(yàn)無(wú)效。對(duì)沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品,可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。
四、特別提示:
本公司的所有產(chǎn)品,僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!