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產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品名稱 ： 大鼠精原細胞
產(chǎn)品品牌 ： 通蔚生物
組織來源 ： 睪丸組織
產(chǎn)品規(guī)格 ： 5×105cells/T 25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介
大鼠精原細胞分離自睪丸組織；睪丸呈微扁的卵圓形，表面光滑，覆蓋著鞘膜臟層；深部是質(zhì)地堅韌的白膜，在睪丸后緣增厚并進入睪丸，形成睪丸縱膈，縱膈發(fā)出許多睪丸小隔深入睪丸實質(zhì)，將實質(zhì)分為睪丸小葉，數(shù)量約為100～200。每個小葉內(nèi)約有2～4條生精小管具有產(chǎn)生精子的作用；生精小管之間的結(jié)締組織中有睪丸間質(zhì)細胞，具有產(chǎn)生雄激素的作用。生精小管首先匯合成為精直小管(也稱直精小管)，精直小管進入睪丸縱膈形成睪丸網(wǎng)，之后睪丸網(wǎng)發(fā)出12～15條輸出小管通過睪丸后上緣進入附睪。生精小管的生精上皮是精子產(chǎn)生的地方，由生精細胞和支持細胞構(gòu)成，成人的生精小管有30～70cm 長。
精子的產(chǎn)生過程包括生精細胞的分化、支持細胞的作用、雄激素的調(diào)節(jié)等。生精細胞并不是一種細胞，它是多種細胞的統(tǒng)稱，包括精原細胞、初級精母細胞、次級精母細胞、精子細胞、精子。前者依次發(fā)育分化為后者，且依次從生精上皮的基部到管腔面排列，最終形成精子進入到管腔之中，并借助生精上皮外側(cè)的肌樣細胞的收縮作用向下一級管腔移動。精原細胞是指由睪丸精子管上皮的原始生殖細胞經(jīng)過多次有絲分裂而形成的細胞。原始的胚細胞經(jīng)分化形成精原細胞，精原細胞經(jīng)復(fù)制形成初級精母細胞，初級精母細胞經(jīng)過減數(shù)第一次分裂后形成次級精母細胞，再經(jīng)過減數(shù)第二次分裂形成精細胞。
精細胞經(jīng)過變形最終形成精子。精原細胞屬于雄性生殖細胞的早期發(fā)育階段，能不斷地進行有絲分裂，增加細胞數(shù)量，并分化為精母細胞。精原細胞貼近基膜，細胞呈圓形，核大而圓，梁色深。精原細胞在男性的一生中具有幾乎無限分裂的能力，而且分裂過程中能夠保持原有的基因性狀 不變。在增殖過程中，通過精原細胞的分裂和分化，由精原細胞產(chǎn)生精母細胞，進入成熟 分裂，因而通過增殖可大大增加精母細胞的數(shù)量。
按理論推算，一個精原細胞通過數(shù)次細 胞分裂，可形成上百個初級精母細胞。但在生精過程早期，生精細胞很易發(fā)生變性，故實 際上少于這個數(shù)字。在精原細胞的增殖過程中，有一部分Ad型精原細胞不再繼續(xù)分裂， 而是保留下來，成為新的精原干細胞，因此通過增殖不僅能使精原干細胞不斷得到更新， 且能使精原干細胞保持一定數(shù)量，從而使精子的產(chǎn)生持續(xù)地進行下去，不會枯竭。
方法簡介
通蔚生物實驗室分離的大鼠精原細胞采用混合酶多步消化法制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶 。
質(zhì)量檢測
通蔚生物實驗室分離的大鼠精原細胞經(jīng)A P (堿性磷酸酶)免疫組化染色鑒定，純度可達90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 ： 含F(xiàn)BS、生長添加劑、G D N F、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ： 每2-3天換液一次
生長特性 ： 貼壁
細胞形態(tài) ： 圓形、橢圓形
傳代特性 ： 可傳2-3代
傳代比例 ： 1:2
消 化 液 ： 0.25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 ： 氣相：空氣，95% ；C O2，5%
大鼠精原細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片
使用方法
大鼠精原細胞是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈圓形、橢圓形，在通蔚生物技術(shù)部標準操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T 25細胞培養(yǎng)瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1) 收集T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基至50ml離心管中，用吸管吸取PBS，吹洗細胞培養(yǎng)瓶1-2次，收集清洗液；經(jīng)1200-1500rpm 離心3min，棄上清，收集細胞沉淀①。
2) 添加0.25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，收集細胞懸液至離心管中；經(jīng)1200-1500rpm 離心3min，棄上清，收集細胞沉淀②。
4) 吸取5ml新鮮完全培養(yǎng)基，重懸細胞沉淀①、細胞沉淀②,把①、②混勻。
5) 用吸管輕輕吹打混勻、分散細胞，按實驗需求接種于實驗器皿內(nèi)，然后補充適量新鮮的
完全培養(yǎng)基，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
6) 待細胞狀態(tài)穩(wěn)定后，用于實驗；可以每2-3天換液一次新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1m g/m l），明膠（0.1% ），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和通蔚生物技術(shù)部溝通。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
