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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
產(chǎn)品名稱(chēng) ：大鼠外周血中性粒細(xì)胞
產(chǎn)品品牌 ：通蔚生物
組織來(lái)源 ：外周血
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡(jiǎn)介
大鼠外周血中性粒細(xì)胞分離自外周血。外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞，我們把這樣得到的干細(xì)胞稱(chēng)為外周血干細(xì)胞，在二十一世紀(jì)初人類(lèi)開(kāi)始的生命方舟計(jì)劃中首次提出外周血這一新概念。白細(xì)胞是一類(lèi)無(wú)色、球形、有核的血細(xì)胞。白細(xì)胞不是一個(gè)均一的細(xì)胞群，根據(jù)其形態(tài)、功能和來(lái)源部位可以分為三大類(lèi) ：粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，其中粒細(xì)胞又可根據(jù)胞質(zhì)中顆粒的染色性質(zhì)不同，分為中性粒細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞三種。
中性粒細(xì)胞是在瑞氏(W right) 染色血涂片中，胞質(zhì)呈無(wú)色或極淺的淡紅色，有許多彌散分布的細(xì)小的(0. 2～0. 4微米) 淺紅或淺紫色的特有顆粒。細(xì)胞核呈桿狀或2～5分葉狀，葉與葉間有細(xì)絲相連。中性粒細(xì)胞具趨化作用、吞噬作用和殺菌作用。中性粒細(xì)胞來(lái)源于骨髓，具有分葉形或桿狀的核，胞漿內(nèi)含有大量既不嗜堿也不嗜酸的中性細(xì)顆粒。這些顆粒多是溶酶體，內(nèi)含髓過(guò)氧化酶、溶菌酶、堿性磷酸酶和酸性水解酶等豐富的酶類(lèi)，與細(xì)胞的吞噬和消化功能有關(guān)。
中性粒細(xì)胞在血液的非特異性免疫中起著十分重要的作用，它處于機(jī)體抵御微生物病原體，特別是在化膿性細(xì)菌入侵的第一線，具有很強(qiáng)的吞噬活性，可吞噬細(xì)菌、衰老的紅細(xì)胞、抗原一抗體復(fù)合物和壞死的細(xì)胞等。中性粒細(xì)胞內(nèi)含有大量溶酶體酶，因此能將吞噬入細(xì)胞內(nèi)的細(xì)菌和組織碎片徹底分解。當(dāng)中性粒細(xì)胞吞噬數(shù)十個(gè)細(xì)菌后，自身發(fā)生解體，所釋出的各種溶酶體酶類(lèi)能溶解周?chē)M織而形成膿液。中性粒細(xì)胞是人體內(nèi)壽命最短的細(xì)胞，一般體外培養(yǎng)12-24h內(nèi)活性穩(wěn)定，48h活性下降，96h基本死亡。
方法簡(jiǎn)介
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠外周血中性粒細(xì)胞采用取外周血、通過(guò)密度梯度離心法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
通蔚生物實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠外周血中性粒細(xì)胞經(jīng)瑞氏染色法，純度可達(dá)90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 ：含F(xiàn)BS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 ：懸浮
細(xì)胞形態(tài) ：圓形
傳代特性 ：不增殖。不傳代
傳代比例 ：不傳代
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 ：氣相 ：空氣，95% 。C O2，5%
大鼠外周血中性粒細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用通蔚生物配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片
使用方法
大鼠外周血中性粒細(xì)胞是一種懸浮細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈圓形，在通蔚生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞不增殖。不傳代。建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 懸浮細(xì)胞處理
1) 收集T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基至50ml離心管中，用PBS清洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶1-2次，收集清洗液。
2) 1200-1500rpm 離心3min，棄上清，收集細(xì)胞沉淀。
3) 加入5ml新鮮完全培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打混勻、分散細(xì)胞。將分散好的細(xì)胞調(diào)整合適密度接種至培養(yǎng)器皿中，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 若遇到懸浮細(xì)胞團(tuán)塊較大，無(wú)法機(jī)械吹散時(shí)，向步驟2) 中細(xì)胞沉淀添加0. 25% 胰蛋白酶消化液2m L至離心管中，用吸-管輕輕吹打混勻，37℃溫浴2-3min，消化結(jié)束后，加入胰酶抑制劑(或血清) 終止消化，用吸管輕輕吹打，分散細(xì)胞。1200rpm 離心5min，棄上清，收集細(xì)胞沉淀。
5) 加入5ml新鮮完全培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打混勻。按傳代比例進(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5m L，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
6) 待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中，胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和通蔚生物技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問(wèn)題得到解決。
特殊注意事項(xiàng)
5. 此細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，請(qǐng)注意不要直接倒掉，造成損失。懸浮細(xì)胞因多數(shù)胞體較小，離心收集時(shí)，請(qǐng)注意懸液中細(xì)胞是否收集完全，可適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)或增加離心時(shí)間3-5m in，增加細(xì)胞獲取量。
