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產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品名稱 ：大鼠外周血中性粒細胞
產(chǎn)品品牌 ：通蔚生物
組織來源 ：外周血
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T 25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介
大鼠外周血中性粒細胞分離自外周血。外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細胞，我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中首次提出外周血這一新概念。白細胞是一類無色、球形、有核的血細胞。白細胞不是一個均一的細胞群，根據(jù)其形態(tài)、功能和來源部位可以分為三大類 ：粒細胞、單核細胞和淋巴細胞，其中粒細胞又可根據(jù)胞質(zhì)中顆粒的染色性質(zhì)不同，分為中性粒細胞、嗜酸粒細胞和嗜堿粒細胞三種。
中性粒細胞是在瑞氏(W right) 染色血涂片中，胞質(zhì)呈無色或極淺的淡紅色，有許多彌散分布的細小的(0. 2～0. 4微米) 淺紅或淺紫色的特有顆粒。細胞核呈桿狀或2～5分葉狀，葉與葉間有細絲相連。中性粒細胞具趨化作用、吞噬作用和殺菌作用。中性粒細胞來源于骨髓，具有分葉形或桿狀的核，胞漿內(nèi)含有大量既不嗜堿也不嗜酸的中性細顆粒。這些顆粒多是溶酶體，內(nèi)含髓過氧化酶、溶菌酶、堿性磷酸酶和酸性水解酶等豐富的酶類，與細胞的吞噬和消化功能有關(guān)。
中性粒細胞在血液的非特異性免疫中起著十分重要的作用，它處于機體抵御微生物病原體，特別是在化膿性細菌入侵的第一線，具有很強的吞噬活性，可吞噬細菌、衰老的紅細胞、抗原一抗體復(fù)合物和壞死的細胞等。中性粒細胞內(nèi)含有大量溶酶體酶，因此能將吞噬入細胞內(nèi)的細菌和組織碎片徹底分解。當中性粒細胞吞噬數(shù)十個細菌后，自身發(fā)生解體，所釋出的各種溶酶體酶類能溶解周圍組織而形成膿液。中性粒細胞是人體內(nèi)壽命最短的細胞，一般體外培養(yǎng)12-24h內(nèi)活性穩(wěn)定，48h活性下降，96h基本死亡。
方法簡介
通蔚生物實驗室分離的大鼠外周血中性粒細胞采用取外周血、通過密度梯度離心法制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。
質(zhì)量檢測
通蔚生物實驗室分離的大鼠外周血中性粒細胞經(jīng)瑞氏染色法，純度可達90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 ：含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長特性 ：懸浮
細胞形態(tài) ：圓形
傳代特性 ：不增殖。不傳代
傳代比例 ：不傳代
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 ：氣相 ：空氣，95% 。C O2，5%
大鼠外周血中性粒細胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片
使用方法
大鼠外周血中性粒細胞是一種懸浮細胞，細胞形態(tài)呈圓形，在通蔚生物技術(shù)部標準操作流程下，細胞不增殖。不傳代。建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T 25細胞培養(yǎng)瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 懸浮細胞處理
1) 收集T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基至50ml離心管中，用PBS清洗細胞培養(yǎng)瓶1-2次，收集清洗液。
2) 1200-1500rpm 離心3min，棄上清，收集細胞沉淀。
3) 加入5ml新鮮完全培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打混勻、分散細胞。將分散好的細胞調(diào)整合適密度接種至培養(yǎng)器皿中，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 若遇到懸浮細胞團塊較大，無法機械吹散時，向步驟2) 中細胞沉淀添加0. 25% 胰蛋白酶消化液2m L至離心管中，用吸-管輕輕吹打混勻，37℃溫浴2-3min，消化結(jié)束后，加入胰酶抑制劑(或血清) 終止消化，用吸管輕輕吹打，分散細胞。1200rpm 離心5min，棄上清，收集細胞沉淀。
5) 加入5ml新鮮完全培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打混勻。按傳代比例進行接種傳代，然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5m L，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
6) 待細胞狀態(tài)穩(wěn)定后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和通蔚生物技術(shù)部溝通。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
特殊注意事項
5. 此細胞為懸浮細胞，請注意不要直接倒掉，造成損失。懸浮細胞因多數(shù)胞體較小，離心收集時，請注意懸液中細胞是否收集完全，可適當加大離心轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)或增加離心時間3-5m in，增加細胞獲取量。
